Стрептококк срр

Стрептококк срр

Лабораторная диагностика кокковых инфекций. Стафилококки. Забопевання  полости рта и одонтогенные процессы вызваны стафилококками.

Лабораторная диагностика стрептококковых инфекций. Кариесогенные    стрептококки полости рта

Нейссерии и другие грамотрицательные бактерии полости рта (моракселлы, ацинетобактерии,вейлонеллы).

 

  Микроорганизмы, которые имеют шаровидную форму (кокки), принадлежат к самым древним на Земле. Они достаточно широко распространены в природе. Согласно с последней классификацией бактерий Берги (1986) кокковые микробы разделяют на три семейства:

 1. Micrococcaceae (микрококки, стафилококки, тетракокки, сарцины).

2. Deinococcaceae (стрептококки, пептококи, пептострептококи).

3. Neisseriaceae (нейсерии, вейлонеллы).

  Характерным общим признаком патогенных коков является их способность вызывать воспалительные процессы с образованием гноя. В связи с этим их часто называют гноєродными (пиогенными) кокками. Наибольшее значение в инфекционной патологии человека имеют стафилококки, стрептококки и нейсерии.

Стафилококки (Staphylococcus)

  Патогенный стафилококк впервые открыл Л. Пастер в 1880 году. Более детально его свойства описал Ф. Розенбах (1884).

  Морфология и физиология.

Стафилококки имеют правильную круглую форму размером 0,5 — 1,5 мкм

В мазках размещаются в виде неправильных скоплений, которые напоминают гроздья винограда

 

   

 

При изготовлении мазков из гноя типичного расположения клеток может не быть.  Стафилококки граммположительные, неподвижные, не образуют спор, отдельные виды в организме имеют нежную капсулу. В состав клеточной стенки входят пептидогликан (муреин) и тейхоевые кислоты.

Стафилококки — факультативные анаэробы, лучше растут в аэробных условиях. К питательным средам непритязательные, хорошо культивируются на простых средах. На МПА колонии правильной круглой формы, выпуклые, непрозрачные, с гладкой и блестящей, будто полируемой поверхностью, окрашенные в золотистый, палевый, белый, лимонно-желтый цвет, в зависимости от цвета пигмента.

 

   На кровяном агаре колонии окруженные зоной гемолиза.

 В МПБ вызывают помутнение и осадок на дне. В бактериологических лабораториях стафилококки часто культивируют на средах с 7-10 % хлорида натрия. Такую высокую концентрацию соли другие бактерии не выдерживают. Следовательно, солевой агар является селективной средой для стафилококков.
 Стафилококки выделяют протеолитические и сахаролитические ферменты. Они разжижают желатин, вызывают зседание молока, ферментируют ряд углеводов с выделением кислоты.
 Токсинообразование.
Стафилококки, особенно Staphylococcus aureus, выделяют экзотоксины и много “ферментов агрессии”, которые имеют важное значение в развитии стафилококковых инфекций. Токсины их достаточно сложные. Описывают много вариантов гемотоксина, лейкоцидинов, некротоксинов, летальный токсин. В настоящее время известны альфа-, бета-, гама- и гемолизин — дельта, который вызывает гемолиз эритроцитов человека и многих видов животных. Лейкоцидины разрушают лейкоциты, макрофаги и другие клетки, а в меньших концентрациях подавляют их фагоцитарную функцию. Некротоксин влечет некроз кожи, а летальный токсин при внутривенном введении — почти мгновенную смерть. Золотистые стафилококки продуцируют ексфолиатины, которые вызывают импетиго детей и пузырчатку новорожденных.

 

Staphylococcus aureus

 

Staphylococcus epidermidis

 

Staphylococcus saprophyticus

 

 

Отдельные виды способны выделять энтеротоксины, которые специфически действуют на энтероциты кишечника, что приводит к возникновению пищевых токсикоинфекций и энтероколитов. Описано шесть разновидностей энтеротоксинов (A, B, C, D, E, F), которые являются сравнительно простыми белками.

 В патогенном действии стафилококков, кроме токсинов, важное значение имеют ферменты агрессии: плазмокоагулаза, фибриназа, дезоксирибонуклеаза, гиалуронидаза,

Коагулазний тест Staphylococcus aureus

 

Коагулазний тест Staphylococcus epidermidis

 

 протеиназа, желатиназа, липаза,  и тому подобное. Они являются стабильным признаком отдельных видов. При определении отдельных из них (коагулаза, гиалуронидаза, ДНК-аза) решают вопрос о виде и вирулентности выделенных культур. Важное значение в проявлении патогенных свойств стафилококков имеет белок А. Он способный реагировать с IgG. Комплекс белок А+IgG инактивирует комплемент, снижает фагоцитоз, вызывает повреждение тромбоцитов.
 В последние годы дискутируется вопрос о патогенности стафилококков. Одни ученые относят их к условно-патогенным бактериям, другие убедительно доводят, что непатогенных стафилококков не существует. Теперь последняя теория является доминирующей. Возникновение заболеваний в конечном результате зависит от иммунной реактивности организма.

                           

Staphylococcus aureus          ДНК-азный  тест      Staphylococcus epidermidis

 

 

 

Лецитиназный тест   Staphylococcus aureus

 

К стафилококкам чувствительные люди, большой и малый рогатый скот, кони, свиньи, а среди лабораторных животных — кролики, мыши, котята.

  Антигены и классификация. Антигенная структура стафилококков достаточно сложная и вариабельная. Описано возле 30 антигенов, связанных с белками, тейхоевыми кислотами, полисахаридами. Основным из них является капсульный белок А.

К роду Staphylococcus входят 29 видов, но не все они вызывают заболевание у человека. В настоящее время бактериологические лаборатории Украины идентифицируют лишь три вида: S. aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus. Разработанные тесты для определения еще восьми видов.

 Экология и распространение. Главными биотопами стафилококков в организме хозяина является кожа, слизистые оболочки и кишечник. Они входят в состав нормальной микрофлоры тела человека и находятся с ней в симбиозе. Однако, при возникновении стафилококковых инфекций могут поражаться и другие органы и ткани. В нашу окружающую среду стафилококки попадают от больных людей и животных и носителей. Их постоянно находят в воздухе, воде, почве, на многообразных предметах потребления. При контакте с больными у отдельных личностей может формироваться резидентное стафилококковое бактерионосительство, когда постоянным местожительством их становится слизистая оболочка носа, откуда они выделяются массивными дозами. Такое носительство особенно опасное среди медицинского персонала больниц, поскольку носители могут стать источником внутригоспитальных инфекций.

 Стафилокококи достаточно стойкие во внешней среде. При комнатной температуре они выживают на предметах ухода за больными на протяжении 1-2 месяцев. При кипячении погибают мгновенно, при 70-80 °С — через 30 хв. Раствор хлорамина (1 %) вызывает их гибель через 2-5 мин. Очень чувствительные к брильянтовому зеленому, который широко применяют при лечении гнойных заболеваний кожи.

 Заболевания человека. Стафилококки чаще всего будут поражать кожу, ее придатки, подкожную клетчатку. Они вызывают фурункулы, карбункулы, панариции, абсцессы, флегмоны, маститы, лимфадениты, нагноение ран. Их выделяют также при пневмониях, бронхитах, плевритах. Они могут вызывать ангины, тонзилиты, гаймориты, отиты, конъюнктивиты. Стафилококки влекут также заболевание нервной системы (менингиты, абсцессы мозга) и сердечно-сосудистой системы (миокардиты, эндокардиты). Очень опасными бывают пищевые токсикоинфекции, энтероколиты, холециститы. При проникновении в кровь или костный мозг вызывают соответственно сепсис

 

 и остеомиелит. Однако все заболевания стафилококковой этиологии не рассматривают как острозаразные.

 

 

Описание: http://www.rit.edu/~japfaa/staph.jpg

 Иммунитет. Врожденной невосприимчивости к стафилококкам у людей нет, однако резистентность к ним достаточно высока. Несмотря на постоянный контакт со стафилококками, инфицирование возникает сравнительно редко. В результате перенесенной инфекции развивается иммунитет против самих микробов, их токсинов, ферментов, протеина А, но он недолговременен.
 

 

Лабораторная диагностика.  Материалом для исследования служит кровь, гной, слизь, моча, промывные воды желудка, испражнения, остатки пищевых продуктов. Гной исследуют бактериоскопическим и бактериологическими методами, остальные материалы — бактериологическим. После выделения чистой культуры устанавливают вид за такими факторами как способность раскладывать глюкозу и маннит в анаэробных условиях, образование плазмокоагулази, гемолизина, ДНК-азы, белка А, способностью раскладывать сахара. Для выявления источников инфекции и путей ее передачи, особенно при вспышках заболеваний в роддомах и хирургических стационарах, проводят фаготипирование выделенных культур с помощью международного набора стафилококковых бактериофагов . Обязательно определяют чувствительность выделенных культур к антибиотикам с целью назначения для лечения рациональных химиотерапевтических препаратов.

 

При заболеваниях, вызванных патогенными стафи­лококками (Staphylococcus aureus), исследуют гной, от­деляемое слизистой оболочки, кровь, мокроту, мочу, спинномозговую жидкость; в случае пищевых отравле­ний — рвотные массы, испражнения больных, остат­ки пищи.

При открытых гнойных поражениях материал берут ватным тампоном после удаления верхнего слоя гноя, в котором могут находиться непатогенные стафилокок­ки и другие микроорганизмы — обычные обитатели ко­жи и воздуха. При наличии закрытых гнойных очагов делают пункцию и выливают гной из шприца в стериль­ную пробирку. Отделяемое слизистой оболочки снима­ют тампоном. Мочу, мокроту собирают в стерильные пробирки и банки. Кровь, взятую шприцем из локтевой вены, и спинномозговую жидкость с соблюдением пра­вил асептики сеют у постели больного во флакон, со­держащий 100—200 мл сахарного бульона (рН 7,2— 7,4). Стафилококки хорошо размножаются и на про­стых средах, однако лучше использовать сахарный буль­он, так как септицемия может быть вызвана не только стафилококками, но и более требовательными к пита­тельным средам микроорганизмами.

Бактериоскопическое   исследование.   Гной,  мокроту, отделяемое   зева   и   другие   материалы,   подлежащие изучению, за исключением крови, микроскопируют. Гной густой консистенции вносят в каплю стерильной воды, мазки делают тампоном или петлей и окрашивают по Граму. Стафилококки грамположительны, располагают­ся небольшими скоплениями, попарно, короткими це­почками. Дифференцировать стафилококки и стрептококки по расположению и тинкториальным свойствам довольно трудно, поэтому, не ограничиваясь микроскопией, производят посев исследу­емого материала. изучению, за исключением крови, микроскопируют. Гной густой консистенции вносят в каплю стерильной воды, мазки делают тампоном или петлей и окрашивают по Граму.

Бактериологическое исследование. В 1-й день иссле­дования петлей или шпателем сеют материал в чашки с 3—5 % кровяным, молочно-солевым и желточно-солевым агаром и помещают в термостат на 18—24 ч при температуре 37 °С.

Для выделения стафилококков используется сухая элективная среда, представляющая собой смесь гидро­лизина с истекшим сроком годности и аминопептида (1:1). На этой среде стафилококки развиваются быст­рее, чем на других питательных средах. Ее можно ис­пользовать в качестве основы для приготовления молочно-желточно-солевого агара с целью определения пигментообразования и лецитиназной активности.

На 2-й день исследования изучают колонии. На плотных средах стафилококки образуют выпуклые, не­прозрачные колонии средней величины, гомогенной или мелкозернистой структуры. Патогенные штаммы на кро­вяном агаре с 0,25—0,5 % глюкозы образуют вокруг колоний зону гемолиза. На желточно-солевом агаре большая часть патогенных стафилококков вызывает лецитовителлазную (желточную) реакцию, проявляющу­юся в образовании вокруг колонии зоны помутнения с радужным венчиком по периферии.

На чашках с молочно-солевым агаром учитывают образование пигмента у обладающих этим свойством штаммов. Он может быть золотистым, белым, лимонно-желтым.

При микроскопии в мазках обнаруживают типичные грамположительные стафилококки.

Дальнейшее исследование направлено на выделение чистой культуры стафилококка, для чего колонии пе­ресевают на скошенный агар.

Патогенные стафилококки кроме гемолитической и лецитиназной   активности   обладают  способностью  коагулировать плазму, вызывать некроз кожи у кролика, разрушать ДНК.

На 3-й день бактериологического исследования для выявления плазмокоагулазы выделенную культуру вно­сят в пробирку с цитратной плазмой кролика. Для это­го 10 мл крови, взятой из сердца кролика, наливают в пробирку с 1 мл 5 % раствора натрия цитрата; после центрифугирования или отстаивания отделяют плазму, разводят ее изотоническим раствором натрия хлорида 1:4 и разливают в стерильные пробирки по 0,5 мл. В настоящее время выпускают сухую нитратную плаз­му, которую перед применением разводят изотониче­ским раствором натрия хлорида. Посевы помещают в термостат при температуре 37 СС и, наблюдая за ними, отмечают время проявления коагуляции — свертывания плазмы. Из этой же культуры готовят миллиардную взвесь (1 млрд. микроорганизмов в 1 мл) и 0,2 мл ее вводят внутрикожно кролику со светлой шерстью. Спу­стя 1—2 суток на месте введения образуется некроз кожи.

Для проведения реакции плазмоагглютинации в про­бирку наливают плазму и на расстоянии 0,5 СЃРј от ее уровня растирают петлей чистую культуру стафилокок­ка, затем петлей вносят плазму в культуру. При поло­жительном результате отчетливо видны хлопья агглютината на стенке пробирки.

Для определения ДНК-азной активности в чашку Петри с агаром Хоттингера и ДНК* засевают суточную культуру стафилококка маленькими бляшками. Через сутки в чашку вносят 5 мл IN раствора НС1 и через 3—5 мин учитывают зоны просветления, свидетельст­вующие о наличии ДНК-азы.

Лизоцимную активность стафилококков считают до­полнительным признаком патогенности. Для ее обна­ружения засевают бляшками суточную агаровую культуру стафилококка на плотную питательную среду с бактериальной суспензией Micrococcus lysodeicticus. При выделении лизоцима вокруг колонии стафилокок­ков образуются зоны лизиса.

 Навеску нуклеиновой кислоты из расчета 10 мг/мл ДНК помещают в дистиллированную воду, добавляя на каждые 20 мл воды 1 мл 0,8 % раствора едкого натра, и прогревают до полного растворения. К расплавленному и охлажденному до 50 °С МПА прибавляют этот раствор ДНК из расчета 1 мг/мл (на 9 мл МПА — 1 мл раствора ДНК). Такая среда может сохраняться после стерили­зации текучим паром до 2 месяцев. При проведении опыта агаро­вую среду с ДНК. расплавляют, добавляют к 10 мл среды 0,1 мл стерильного 10 % раствора кальция хлорида, перемешивают и вы­ливают на слой хорошо подсушенного питательного агара в чашке Петри.

Определение фаговара культур имеет важное эпи­демиологическое значение для выявления источника инфекции. Основной международный набор стафилокок­ковых фагов состоит из 21 типа, разделенных на 4 груп­пы. Для типирования используют стафилококковые фа­ги в двух рабочих разведениях: 1 ТР (тест-разведение), которое должно быть не ниже 10-3, и 100 ТР — не ни­же 10-1. Фаготипирование начинают с 1 ТР, в случае отрицательного результата используют разведение 100 ТР.

Для диагностики стафилококковых заболеваний мож­но использовать РИГА с эритроцитарным диагностикумом (эритроциты сенсибилизируют α-токсином стафи­лококка).

Обязательным также является определение чувстви­тельности выделенных стафилококков к антибиотикам для направленного лечения конкретного больного.

Для выделения гемокультуры стафилококков посев крови в сахарном бульоне выдерживают в термостате при температуре 37 °С в течение 18—24 ч. Стафилококк! вызывает равномерное помутнение среды. На 2-й день исследования из гемокультуры готовят мазки, затем пе­ресевают ее на скошенный МПА и в чашку с кровяным агаром для выявления гемолитической активности ста­филококков. На 3-й день исследования культуру ста­филококка, полученную на скошенном агаре, изучают так же, как культуру, выделенную из гноя или других материалов.

Для посева экссудата, гноя из невскрывшихся абс­цессов, флегмон используют МПА или 5 % кровяной агар. Посевы выдерживают в термостате при темпера­туре 37 °С в течение 18—24 ч, затем выделяют чистую культуру и проводят ее идентификацию вышеописанны­ми методами.

При пищевых отравлениях исследуемый материал микроскопируют, а затем сеют в чашки с МПА и в бульон, содержащий 1 % глюкозы (для обогащения). Материал, загрязненный посторонними микроорганиз­мами, сеют на кровяной агар, содержащий 6—7 % нат­рия хлорида. На этой среде стафилококки хорошо рас­тут и проявляют гемолитическое действие   (они могут размножаться в присутствии 12 % соли и 50 % сахара), развитие энтеробактерий и бацилл задерживается, а протей не дает сплошного роста в виде пленки.

Посевы помещают в термостат при температуре 37 °С. На следующий день изучают колонии, выделяют чистые культуры стафилококков и идентифицируют их. Патогенные стафилококки, вызывающие пищевые от­равления, образуют золотистый, реже белый пигмент, разжижают желатин, вызывают гемолиз и коагулиру­ют плазму.

Для выявления продукции энтеротоксина культуру стафилококка сеют в специальную питательную среду *. Посевы помещают в эксикатор с 20 % СО2 и инкуби­руют при температуре 37 °С в течение 3—4 суток, а за­тем фильтруют через мембранные фильтры № 3 и 4. Полученный фильтрат объемом 10—15 мл смешивают с равным количеством теплого молока и скармливают котятам в возрасте 1—2 месяцев или же вводят фильт­рат им в желудок с помощью зонда. При наличии энте­ротоксина через 30—60 мин у котят возникает рвота — основной признак отравления, а через 2—3 ч появляет­ся понос, продолжающийся в течение 2—3 дней, в тя­желых случаях возможен летальный исход. Фильтрат можно вводить котятам внутрибрюшинно, после пред­варительного нагревания его при температуре 100 °С в течение 30 мин для инактивации термолабильных фрак­ций токсина. В настоящее время токсигенность выде­ленных культур стафилококков определяют в опыте in vitro с помощью реакции диффузной преципитации в геле.

Патогенные стафилококки могут находиться в воз­духе операционных, перевязочных, родильных палат и других больничных помещений. Для обнаружения их делают  посевы   воздуха   на   желточно-солевой   агар **.

* На 1 000 мл дистиллированной воды добавляют 20 Рі пептона, 1 Рі однозамещенного фосфорно-кислого натрия, 1 Рі однозамещенного фосфорно-кислого калия, 5 Рі натрия хлорида, 0,1 Рі кальция хлорида, 0,2 Рі магния хлорида, 0,8 агар-агара (рН 7,0—7,2). Стерилизуют 20 мин при температуре 115 «С.

* К 100 мл расплавленного МПА, содержащего 7,5 Рі натрия хлорида, добавляют 20 мл стерильной желточной взвеси, переме­шивают и разливают в чашки. Для приготовления желточной взвеси желток куриного яйца асептически извлекают, отмывают от белка, помещают во флакон с бусами, добавляют 200 мл изотонического раствора натрия хлорида и встряхивают до полного смешивания; хранят в холодильнике.

Определение стафилококкового антитоксина в сыво­ротке крови приобретает большое значение при диагно­стике хронических стафилококковых инфекций (остео­миелит, септикопиемия и др.), когда бактериологиче­ские исследования, проводимые на фоне массивной антибиотикотерапии, как правило, остаются безрезуль­татными. В основе реакции лежит метод подавления гемолитической активности стафилококкового токсина антитоксином сыворотки больного. Для этого к стафи­лококковому токсину, взятому в определенной дозе, прибавляют сыворотку больного, разведенную 1:5, 1:10, 1:15, 1:20 и т. д., тщательно перемешивают и к смеси добавляют 0,05 мл эритроцитов кролика. Результаты реакции учитывают после пребывания пробирок в тер­мостате при температуре 37 °С в течение часа и затем в продолжение часа при комнатной температуре.

Количество сыворотки, в смеси с которой доза ток­сина, взятая в опыт, дает задержку гемолиза или сла­бый гемолиз, принимают за титр сыворотки.

У практически здоровых детей, так же как и у лиц, перенесших стафилококковую инфекцию кожи или ос­ложнившую хирургическое заболевание, титр стафило­коккового антитоксина не превышает 0,5—4 АЕ/мл. У больных с хроническими стафилококковыми инфек­циями титр, как правило, выше.


 Профилактика и лечение. Предупреждение возникновения и распространения стафилококковых инфекций направлено на выявление и лечение носителей золотистых стафилококков особенно среди медицинского персонала роддомов, хирургических и детских отделений больниц. Необходимо четко выдерживать суровый санитарный режим работы в больничных заведениях, систематически проводить дезинфекцию. Для профилактики стафилококковых инфекций в роддомах важное значение имеет рациональный режим стерилизации, пастеризации и сохранения грудного молока. На промышленных предприятиях для профилактики нагноений при микротравмах применяют защитные мази и пасты. С целью повышения противостафилококкового иммунитета практикуют проведение иммунизации стафилококковым анатоксином лиц, в которых часто возникают травмы и микротравмы. При лечении острых стафилококковых заболеваний назначают антибиотики, сульфаниламидные и нитрофурановые препараты, мирамистин. Выбор препаратов зависит от результатов определения чувствительности к ним выделенной культуры. Для лечения сепсиса, остеомиелита и других тяжелых стафилококковых инфекций используют иммунологические препараты: стафилококковый иммуноглобулин, гипериммунную плазму. При хронических заболеваниях применяют стафилококковый анатоксин, аутовакцину.

 

Стрептококки (Streptococcus)

  Впервые стрептококки открыл Т. Бильрот в 1874 Рі. при раневых инфекциях, позже Л. Пастер обнаружил их при сепсисе, а Ф. Розенбах выделил в чистой культуре.


 Морфология и физиология.
Стрептококки имеют сферическую форму и диаметр 0,5—1 мкм. Располагаются цепочками. Спор не образуют, жгутиков не имеют. Некоторые стрептококки, выделенные из патологического материала, образуют нежную капсулу. Длина цепочек различна: в бульонной культуре они длиннее, чем при росте на плотных питательных средах. Хорошо красятся всеми анилиновыми красками, грамположительны. Большинство стрептококков является факультативными анаэробами, но встречаются и строгие анаэробы (в полости рта и кишечнике). На простых питательных средах стрептококки растут плохо. Хорошо культивируются на питательных средах с глюкозой, кровью, сывороткой при рН 7,2—7,6 и температуре 37°С. На жидких питательных средах стрептококки растут пристеночно или придонно в виде зернистого осадка, оставляя бульон прозрачным. На плотных средах колонии мелкие или средней величины (0,5—2,5 мм), полупрозрачные, плоские, блестящие, гладкие, реже шероховатые. При выращивании на кровяном агаре одни стрептококки образуют колонии, окруженные зоной полного гемолиза, другие — зоной зеленого цвета в результате перевода гемоглобина в метгемоглобин, третьи не изменяют среды. Стрептококки обладают выраженной ферментативной активностью: разлагают глюкозу, мальтозу, лактозу, сахарозу с образованием кислоты, желатин не разжижают.

Стрептококки имеют круглую или овальную форму размером 0,6-1,0 мкм, располагаются в виде цепочек разной длины, граммположительные, неподвижные, не имеют спор,

некоторые виды образуют микрокапсулы.

 За типом дыхания — факультативные анаэробы, хоть есть отдельные виды с сильным анаэробизом. Оптимальная температура для их культивирования — 37 °С. На простых средах не растут. Выращивают их на глюкозном бульйоне и кровяном агаре.

 

 

В жидких средах образуют осадок, бульйон остается прозрачным. По характеру роста на кровяном агаре  стрептококки разделяют на три типа: β-, образуют вокруг колоний зоны гемолиза

 

         

Альфа-гемолиз                        Бета-гемолиз                             Гамма-гемолиз

 

α — вокруг колоний непрозрачные зеленоватые зоны; γ-стрептококки.

 

 Изолированные колонии маленькие, полупрозрачные, блестящие, гладкие и блестящие, реже шершавые. Стрептококки биохимически активны, раскладывают ряд углеводов к кислоте, желатин не разреживают.

  Токсинообразование.Стрептококки выделяют различные экзотоксины: 

1) гемолизины (стрептолизины), которые по своему составу неоднородны (различают О- и S-стрептолизины);

2) лейкоцидин;

3) некротоксин; 

4) летальный токсин; 

5) эритрогенный токсин, специфический скарлатинозный, который действует на эритроциты. С ним связано появление сыпи при скарлатине. Токсин этот состоит из двух фракций: термолабильной, обладающей токсическим действием и антигенными свойствами, и термостабильной, являющейся аллергеном. Помимо этого, у стрептококков обнаружены другие токсические вещества, к которым относятся следующие ферменты: гиалуронидаза (стрептогиалуронидаза), фибринолизин (стрептокиназа), протеиназа и др. У больных стрептококковыми инфекциями обнаруживают антитела к стрептогиалуронидазе, стрептокиназе, О-стрептолизину, протеиназе.

 Стрептококки продуцируют сложный экзотоксин, отдельные фракции которого имеют разное действие на организм: гемотоксин (O- и S-стрептолизины), лейкоцидин, летальный токсин, цитотоксины (повреждают клетки печенки, почек), еритрогенный (скарлатинозный) токсин. Кроме токсинов стрептококки выделяют ряд ферментов патогенности, которые играют важную роль в развитии заболеваний — гиалуронидазу, фибриназу, ДНК-азу, протеиназу, амилазу, липазу и тому подобное. Для стрептококков характерное наличие термостабильных эндотоксинов и аллергенов.

 Антигены и классификация. У стрептококка находят различные нерастворимые антигены, связанные с микробной клеткой. В цитоплазме клетки содержится видовой антиген Р нуклеопротеидной природы, единый для всех стрептококков. Антиген этот находят также у стафилококков и пневмококков. Субстанция Р способствует сенсибилизации организма; защитные антитела к этому антигену не продуцируются и поэтому при повторном заражении стрептококком сенсибилизация нарастает. Более поверхностно, в клеточной стенке, находится полисахаридный групповой антиген С. Все стрептококки разделены на 17 групп, каждая из которых имеет свой специфический антиген С. На поверхности клеточной стенки стрептококка расположены протеиновые типовые антигены Ми Т. Наибольшее значение имеет М-субстанция, так как с ней связана вирулентность микроба. Антитела, образующиеся против М-антигена в организме, обладают защитными свойствами. Эти антитела защищают человека от заболеваний, вызванных тем же типом стрептококка.

Классификация. По классификации Шоттмюллера (1903) и Брауна (1915), все стрептококки разделены на три группы:

1) гемолитический (в-стрептококк (Streptococcus haemolyticus) на кровяном агаре образует колонии, окруженные зоной прозрачного гемолиза; 

2) зеленящий а-стрептококк (Str. viridans) на кровяном агаре Дает зеленовато-серые колонии с зоной гемолиза зеленоватого цвета;

3) негемолитический -у-стрептококк (Str. anhaemolyticus) не изменяет кровяного агара. Гемолитическую способность стрептококка рассматривали как критерий патогенности. Однако установлено, что заболевания вызываются не только гемолитическими стрептококками. В свою очередь гемолитические стрептококки могут быть непатогенными.

Более совершенной оказалась классификация, предложенная Ленсфильд (1933) и Гриффитсом (1935), основанная на антигенной структуре стрептококков. Согласно этой классификации, все стрептококки были разбиты по групповому С-антигену на 17 групп — от А до S.

http://microbiology.ucoz.org/_si/0/54470095.jpg

Клетки стрептококков имеют М-антиген (белок), который предопределяет их вирулентные и иммуногенные свойства, сложный Т-антиген (белок), С-антиген (полисахарид) и Р-антиген (нуклеопротеид). За наличием полисахаридных фракций все стрептококки разделены на 20 серологических групп, которые отражаются большими буквами латинского алфавита от А до V. Внутри отдельных групп они еще разделяются на виды, серовары, обозначенные цифрами. Большинство болезнетворных для человека стрептококков входят в группу А. Кроме этого, определенное клиническое значение имеют группы B, C, D, H, K.

 Род Streptococcus насчитывает много видов. Наибольшее значение из них имеют S. pyogenes, S. viridans, S. pneumoniae, S. faecalis, анаэробные стрептококки. К условно-патогенным видам принадлежат представители нормальной микрофлоры ротовой полости (S. salivarius, S. mitis, S. sanguis и тому подобное), а также других биотопов человека.

Наибольшее значение имеют группы А, В, С и D. В группу А входит большинство типов, патогенных для человека. Серологическая группа В включает как сапрофиты, так и патогенные типы. Группа D состоит главным образом из непатогенных штаммов; в нее же входят энтерококки — нормальные обитатели кишечника человека и животных. В отличие от других стрептококков энтерококки отличаются большей устойчивостью во внешней среде, температурный диапазон их роста 10—45°С, в то время как у других стрептококков он составляет 20— 40°С. Для дифференциации энтерококков от стрептококков группы А используют их способность расти в 40% желчи, в бульоне, содержащем 6,5% хлорида натрия, редуцировать и свертывать лакмусовое молоко с 0,1% метиленовым синим. Энтерококки обладают антагонистическими свойствами по отношению к представителям семейства кишечных бактерий. В кишечнике детей энтерококков больше, чем кишечных палочек.
Из 53 типов стрептококков, обнаруженных у человека, 49 входят в группу А, 3 — в группу С и 1 тип — в группу G.

Принадлежность культур к одной из серологических групп определяют с помощью реакции преципитации с групповыми стрептококковыми сыворотками, а к серологическим типам — реакции агглютинации с типоспецифическими сыворотками.

Патогенность. Из лабораторных животных наиболее чувствительны к стрептококку кролики и белые мыши. Однако штаммы, патогенные для человека, не всегда вирулентны для лабораторных животных.

 Экология. Стрептококки во внешней среде встречаются реже, чем стафилококки. По экологическим признакам они разделяются на несколько групп. Одна из них включает виды, патогенные только для человека (S. pyogenes), другая — для животных и людей (S. faecalis), третья — условно-патогенные (S. salivarius, S. mitis). Стрептококки человеческих эковаров, кроме ротовой полости, встречаются на слизистых оболочках верхних дыхательных путей и половых органов, на коже, в кишечнике. Источником заражения могут быть больные и носители. Заболевания человека возникают как в результате экзогенного, так и эндогенного инфицирования. Основной механизм заражения — воздушно-капельный. В возникновении и развитии стрептококковых инфекций большое значение имеет не только иммунодефицитное состояние, но и предыдущая сенсибилизация организма аллергенами.

  Резистентность стрептококков во внешней среде меньше, чем у стафилококков. В высушенном виде, особенно окруженные белковой оболочкой, они сохраняются несколько дней, но теряют вирулентность. При нагревании до 70 °С погибают на протяжении 1 часа, наиболее употребляемые дезинфицирующие растворы вызывают их гибель через 15-20 мин.

Патогенез и клиника. Стрептококки встречаются во внешней среде реже, чем стафилококки. Стрептококки представляют обширную и разнородную группу. Среди них встречаются постоянные обитатели слизистой оболочки полости рта, зева, влагалища, верхних дыхательных путей, кишечника. Вместе с тем они могут вызывать различные заболевания у человека как в результате аутоинфекции, так и при попадании стрептококков извне (экзогенная инфекция). Находясь на слизистой оболочке зева, стрептококки могут вызвать ангину, хронический тонзиллит. Ослабление защитных сил, охлаждение организма способствуют возникновению и других стрептококковых инфекций: бронхопневмонии, отита, эндокардита, менингита, нефрита, цистита и др. В случае проникновения стрептококков в кровь возможно развитие септического процесса, в частности послеродового сепсиса. Стрептококки могут быть причиной вторичной инфекции при гриппе, катаре верхних дыхательных путей, дифтерии, кори, коклюше. Попадая через поврежденные ткани в организм, они, так же как и стафилококки, вызывают гнойные процессы (послеоперационные нагноения ран, перитониты, флегмоны, абсцессы). Пептострептококки (анаэробные стрептококки) и энтерококки играют роль в патогенезе кариеса зубов. Проникая в ткань зуба, они разрушают дентин и усугубляют течение процесса.

В возникновении и развитии стрептококковых заболеваний большое значение имеют реактивность организма и предварительная сенсибилизация его стрептококком.
Стрептококки вызывают такие специфические заболевания, как рожистое воспаление кожи. Стрептококки группы А занимают особое место в этиологии скарлатины и ревматизма.

Иммунитет. Иммунитет при стрептококковых инфекциях (кроме скарлатины) нестойкий. Во время болезни образуются различные антитела, но защитным свойством обладают только антитоксин и типоспецифические М-антитела. Поэтому иммунитет к инфекции типоспецифический и не защищает от возникновения заболеваний, вызванных другими типами стрептококков. Наряду с этим у лиц, перенесших стрептококковую инфекцию, под влиянием стрептококка наступает аллергизация организма, чем и объясняются склонность к рецидивам и повышенное предрасположение к повторным стрептококковым заболеваниям.

 Заболевания человека.

Стрептококки могут вызывать такие же многообразные гнойно-септические инфекции, как и стафилококки (фурункулы, абсцессы, флегмоны, панариции,, сепсис, остеомиэлит и тому подобное). Но они могут вызывать и другие заболевания, не свойственные стафилококкам — скарлатину, ревматизм, рожу, и тому подобное.

 

 Проникая в кровь женщин при родах, они вызывают послеродовой сепсис. Зеленящие стрептококки вызывают эндокардит.

 Анаэробные и фекальные стрептококки вызывают энтероколиты, принимают участие в развитии кариеса зубов. Проникая в ткань зуба, они разрушают дентин и обременяют ход процесса.

 Иммунитет при стрептококковых инфекциях, кроме скарлатины, имеет слабый, неустойчивый и недолговременный характер. После перенесения заболеваний образуются разные антитела, но защитное значение имеют лишь антитоксины и типоспецифические М-антитела. Из другой стороны, у людей, которые переболели, часто возникает аллергизация организма, чем объясняется склонность к рецидивам и повторным заболеваниям.

  Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служат слизь с рото- и носоглотки, гной, раневое содержание, кровь, мокрота, моча. Его засевают на сахарный бульйон и кровяной агар. Бактериологическое исследование проводят так же, как и при стафилококковых инфекциях. Выделенные чистые культуры идентифицируют по их морфологическим признакам, характеру гемолиза, биохимической активности, что дает возможность определить отдельные виды. Обязательно исследуют чувствительность к антимикробным препаратам. Проводят и серологические реакции.
 Профилактика и лечение. Стрептококки, особенно группы А, как и много лет тому назад, высокочувствительные к пеницилину и эритромицину. Некоторые виды резистентные к тетрациклинам. Аминогликозиди усиливают бактерицидное действие пеницилина. Достаточно эффективные и сульфаниламидные препараты, но к ним легко возникает резистентность. Общие методы профилактики стрептококковых инфекций, в основном, такие же, как и при стафилококковых. Специфические методы профилактики и терапии в совершенстве еще не разработаны.
 Роль стрептококков в этиологии скарлатины и ревматизма
.
Роль стрептококка в этиологии скарлатины. Еще в конце прошлого столетия было высказано предположение, что возбудителем скарлатины является стрептококк, так как его постоянно находили в зеве больных скарлатиной, высевали из крови и органов лиц, умерших от скарлатины. В 1902 Рі. Г. Н. Габричевский получил от больных скарлатиной штамм гемолитического стрептококка и приготовил из него вакцину. В 1904 Рі. И. К. Савченко выделил из стрептококка от скарлатинозного больного токсин и использовал его для гипериммунизации лошадей и получения лечебной антитоксической сыворотки. Полученная сыворотка с успехом применялась для лечения тяжелых форм скарлатины. Несмотря на эти достаточно убедительные данные, многие оспаривали значение стрептококка в этиологии скарлатины главным образом ввиду отсутствия отличий «скарлатинозного» стрептококка от других. Помимо этого, наличие прочного иммунитета после перенесенной скарлатины — явление, нехарактерное для стрептококковых инфекций. Веские доказательства роли стрептококка при скарлатине были представлены американскими учеными супругами Дик (1923). Они получили экспериментальную скарлатину, смазав слизистую оболочку зева добровольцев культурой стрептококка, выделенной от больного скарлатиной. Они же ввели подкожно скарлатинозный токсин лицам, не болевшим скарлатиной, и наблюдали положительную реакцию в виде местного покраснения. У переболевших реакция была отрицательной, что объясняется наличием у них антител к стрептококковому токсину. Реакцию Дика широко применяют как метод выявления иммунитета и восприимчивости к скарлатине. Дальнейшими исследованиями была окончательно установлена роль стрептококка как возбудителя скарлатины. 

Доказательствами стрептококковой этиологии скарлатины являются:

1) закономерное выделение от больных скарлатиной гемолитического стрептококка группы А;

2) положительная реакция Дика у восприимчивых к скарлатине лиц;

3) лечебный эффект применения антитоксической противострептококковой сыворотки;

4) феномен погашения сыпи, наступающий при введении в место локализации сыпи антитоксической сыворотки.
Воспроизвести скарлатину у экспериментальных животных не удается. 

Патогенез и клиника. Входные ворота инфекции слизистая оболочка зева. Источником инфекции являются больные, реконвалесценты и бактерионосители. Заражение происходит воздушно-капельным путем. Поражаются в основном дети в возрасте от 1 года до 5 лет выделяют два периода течения инфекции: первый — токсический, сопровождается появлением сыпи; второй характеризуется аллергическими реакциями. В патогенез скарлатины играет роль не только эритрогенный токсин но и сам микроб.

 Иммунитет. После перенесенного заболевания прочный, преимущественно антитоксический. Повторные заболевания встречаются крайне редко. 
Микробиологическая диагностика. Обычно диагноз устанавливают по клинической картине. В сомнительных случаях используют:

1) реакцию Дика;

2) феномен погашения сыпи (внутрикожное введение 0,1 мл антитоксической сыворотки реконвалесцента); 

3) выделение гемолитического стрептококка из зева;

4) обнаружение в моче, больных специфических преципитинов. 

Профилактика и лечение. Основные меры профилактики сводятся к своевременному выявлению больных, их госпитализации, проведению карантинных мероприятий. Контактным ослабленным детям вводят 1,5—3 мл гамма-глобулина. Несмотря на многочисленные попытки, получить эффективную вакцину против скарлатины не удалось.

Для лечения применяют пенициллин, сульфаниламидные препараты. В случаях тяжелого течения используют антитоксическую противоскарлатинозную сыворотку.
Роль стрептококка при ревматизме. Об участии стрептококка в возникновении ревматического процесса говорят следующие факты:

1) ревматизм возникает через 2—3 нед после острой стрептококковой инфекции (ангина или скарлатина);

2) гемолитический стрептококк часто находят в зеве и крови больных ревматизмом; 

3) в сыворотке крови больных ревматизмом постоянно обнаруживают различные антитела к стрептококку (антистрептолизин, антистрептогиалуронидаза, антистрепто- киназа, а также групповые и типовые антитела к стрептококку); 4) для ревматизма также характерно постоянное нахождение стрептококковых антигенов в ор¬ганизме; 5) в патогенезе ревматизма, как и при других стрептококковых заболеваниях, большую роль играет развитие сенсибилизации к стрептококковым антигенам и его токсину. Косвенным подтверждением роли стрептококка является успешное профилактическое и лечебное применение препаратов пенициллина при ревматизме. В частности, введение бициллина предотвращает последующие атаки ревматизма. Однако стрептококк не исчерпывает всей клинической картины ревматизма. В разви¬тии ревматического заболевания играют роль аутоиммунные процессы. Под влиянием стрептококковой инфекции в организме больного ревматизмом появляются новые антигены — аутоантигены. В ответ на них образуются аутоантитела.

Однако, ввиду того что аутоантигены возникают на базе антигенов организма, образующиеся к ним аутоантитела могут соединяться не только с ними, но и с собственными клетками и тканями организма. Возникает порочный круг, поэтому в настоящее время ревматизм относят к аутоиммунным болезням, патогенез которых изучен еще недостаточно.

Еще в конце прошлого века было выражено предположение, что возбудителем скарлатины является гемолитический стрептококк. Его почти всегда высевали с миндалин больных и из крови умерших от скарлатины детей. В 1904 Рі. И.Г. Савченко получил экзотоксин возбудителя этого заболевания и изготовил антискарлатинозну сыворотку. Супруги Дик (1923) получили токсин (еритрогенин), который вызывал характерное покраснение и сыпь и продуцировался лишь стрептококками, выделенными при скарлатине.

  Скарлатина — острозаразное детское заболевание с внезапным началом, тонзиллитом, повышением температуры, характерной мелкой сыпью на коже.

 

 Заражение происходит воздушно-капельным способом. Источник инфекции — больные и бактерионосители. В первый период болезни действует токсин, во второй — стрептококк выступает возбудителем многих осложнений (отиты, флегмоны шеи, нефриты, воспаления суставов, сепсис). После перенесенной болезни вырабатывается антитоксический и антимикробный иммунитет. Возможные случаи повторного заболевания. Диагноз скарлатины ставится на основании клинической картины и эпидемиологических данных. В сомнительных случаях сеют слизь из ротоглотки, выделяют и идентифицируют стрептококки.
 Лечения проводят антибиотиками (пенициллин, ампиокс, гентамицин, цефамезин) и сульфаниламидными препаратами. С профилактической целью больного изолируют. Переболевших допускают в детские заведения и школы через 12 дней после выздоровления, а тех, что были в контакте — через 7 дней после изоляции. С профилактической целью контактным детям иногда вводят иммуноглобулин.

 Считают, что S. pyogenes может также вызывать ревматизм — острое лихорадочное инфекционно-аллергическое заболевание с подавляющим поражением сердца и суставов. У больных стрептококки часто выделяют с зева и крови, а в более поздний период находят специфические антитела — антистрептолизины, антифибринолизины, антигиалуронидаза. В возникновении и в ходе ревматизма важное значение имеет сенсибилизация организма аллергенами, которая может возникнуть при любой форме стрептококковой инфекции. При лечении ревматизма во всех стадиях применяют пенициллин, бициллин и другие антибиотики. 

 

Лабораторная диагностика стрептококковой инфекции

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования служат:

1) слизь из зева при ангине и скарлатине; 

2) кровь при эндокардите и подозрении на сепсис;

3) гнойное отделяемое из очага поражения; 

4) мокрота при заболеваниях органов дыхания; 

5) моча при заболеваниях почек и мочевыводящих путей. Чаще всего исследуют слизь из зева и кровь. Слизь из зева, взятую стерильным ватным тампоном, засевают на чашки с кровяным агаром. Посевы выдерживают в термостате при 37°С 18—20 ч (первый день). На второй день просматривают колонии, делают мазки, микроскопируют. Колонии, окруженные зоной гемолиза, отсевают в пробирку с бульоном Мартена или кровяным бульоном.

На третий день учитывают характерный рост стрептококка на бульоне Мартена и проводят определение серологической группы стрептококка с помощью реакции преципитации, определяют серологический тип стрептококка в реакции агглютинации на стекле по методу Гриффитса с типовыми антистрептококковыми сыворотками.

Посев 5—10 мл крови для бактериологического исследования производят в колбы с 10-кратным объемом сахарного бульона или печеночного бульона Китта — Тароцци. Посевы выдерживают в термостате 17,2—2 мес, делая контрольные высевы на чашки с кровяным агаром каждые 2—3 дня. Дальнейший ход исследования аналогичен бактериологическому изучению мазков из зева.

Серологический метод диагностики стрептококковых инфекций используют главным образом для определения антител к стрептолизину О, фибринолизину, гиалуронидазе.

При заболеваниях, вызванных патогенными стрепто­кокками (Streptococcus pyogenes), материалом для ис­следования являются гной, кровь, отделяемое слизистой оболочки, моча, мокрота, спинномозговая жидкость. Берут его так же, как при заболеваниях, вызванных стафилококками.

Бактериоскопическое исследование. В мазках из гноя, отделяемого слизистой оболочки, окрашенных по Граму, стрептококки располагаются короткими цепоч­ками, иногда в виде дипло­кокков или единичных кокков. В последнем случае стрептококки нельзя отличить от стафилококков, поэтому производят бактериологическое исследование для из­учения других свойств обнаруженных кокков.

Бактериологическое исследование. Гной, отделяемое слизистой оболочки, мочу, мокроту, спинномозговую жидкость сеют в чашку Петри с   5 % кровяным агаром ( лучше использовать дефибринированную кровь) и в пробирку с сахарным бульоном. На следующий день после инкубации в термостате при температуре 37°С изучают колонии и рост в сахарном бульоне. Streptococ­cus pyogenes развивается с образованием мелких, пло­ских, суховатых колоний зернистой структуры.

Стрептококки, продуцирующие β-гемотоксин (стрептолизин), образуют вокруг колоний зону гемолиза, а для стрептококков, выделяющих α-гемотоксин, харак­терно появление зон позеленения вокруг колоний вслед­ствие образования метгемоглобина. При отсутствии гемотоксина гемолиза не наблюдается. В сахарном бульоне стрептококки дают придонный или пристеноч­ный рост в виде хлопьев или зерен, вся среда остается прозрачной.

В мазках из колоний стрептококков не отмечается типичного расположения кокков в виде цепочек. Клет­ки располагаются одиночно, попарно или небольшими скоплениями. В мазке из культуры в жидкой среде об­наруживают типичные цепочки стрептококков.

На основании полученных данных можно сделать вывод, что выделен S. pyogenes. На дальнейших этапах исследования определяют группу и серовар стрепто­кокка.

Группы стрептококка (по Лэнсфильд) классифици­руют по наличию полисахаридного антигена, для вы­явления которого используют реакцию преципитации с групповыми сыворотками (А, В, С и т. д.).

Серовары стрептококков (по Гриффитсу) характери­зуются присутствием специфического протеинового ан­тигена, который определяют с помощью реакции агглю­тинации на стекле с типовыми агглютинирующими сы­воротками. Для этой цели суточную бульонную куль­туру выделенного стрептококка центрифугируют и раз­водят осадок в 0,5—1 мл изотонического раствора натрия хлорида. На предметном стекле смешивают кап­лю сыворотки с каплей испытуемой культуры. Боль­шинство патогенных стрептококков относится к груп­пе А.

Для выявления β-гемолитического стрептококка группы А можно применять реакцию иммунофлюоресценции. В этом случае готовят мазок из выделенной культуры стрептококка, фиксируют его в течение 15 мин 95 % спиртом, после чего окрашивают в тече­ние 15 мин флюоресцирующей сывороткой, промывают проточной водой, высушивают и микроскопируют в лю­минесцентном микроскопе.

Исследование крови. Посев крови в сахарный буль­он производят так же, как при стафилококковых забо­леваниях. При наличии стрептококка на дне флакона появляются хлопьевидный придонный осадок и гемолиз. В мазках обнаруживаются длинные цепочки стрепто­кокков. Микроскопия позволяет дать предварительный ответ о наличии или отсутствии стрептококка. Для вы­явления гемотоксина делают пересев в чашку с кровя­ным агаром. Через сутки (3-й день исследования) по­являются типичные мелкие колонии, окруженные зоной гемолиза или ореолом зеленоватого цвета. Полученные данные позволяют сделать вывод о присутствии S. руоgenes.

Для выделения анаэробных стрептококков (Рерtostreptococcus anaerobius), которые обитают на слизи­стой оболочке половых органов и могут вызвать после­родовой сепсис, кровь засевают в среду Китта — Тароц-ци. В жидких средах некоторые штаммы анаэробных стрептококков образуют газ.

Патогенные стрептококки хорошо растут на среде Гарро. Она представляет собой МПА (рН 7,4), к кото­рому добавляют 5 % крови и 0,1 % водный раствор генциана фиолетового (0,2 мл на каждые 100 мл МПА). Рост сапрофитической воздушной микрофлоры и энте­рококков на среде Гарро подавляется.

Для определения патогенных свойств стрептококка изучают токсинообразование, в частности наличие фибринолизина (стрептокиназы). В опыте используют пла­зму крови человека, для получения которой к 10 мл крови добавляют 1 мл 2 % раствора натрия цитрата. После отстаивания отделяют неокрашенную плазму, разводят ее 1:3, а затем добавляют 0,5 мл 18—20-часо­вой культуры испытуемого стрептококка и 0,5 мл 0,25 % раствора кальция хлорида. Пробирки осторож­но встряхивают и помещают в водяную баню при тем­пературе 42 °С на 20—30 мин. В это время происходит образование сгустка фибрина. Пробирки оставляют на 20 мин в водяной бане. Если культура стрептококка вы­деляет фибринолизин, сгусток растворяется в течение 20 мин.

В связи с тем, что некоторые штаммы стрептокок­ков медленно растворяют фибрин, через 2 ч пробирки переносят из водяной бани в термостат и результаты учитывают на следующий день.

Методом оценки вирулентности культур стрептокок­ка можно считать определение количества поверхно­стного М-белка, присущего только патогенным штам­мам. Из молодых культур получают солянокислые экстракты   и   в   них   определяют   содержание  М-белка.

Для диагностики скарлатины, как правило, лабора­торные исследования не применяют. В отдельных слу­чаях высевают отделяемое слизистой оболочки зева и выделяют стрептококки различных серогрупп.

Гемолитические стрептококки, выделяющие β- и α-токсины, могут находиться в воздухе различных боль­ничных помещений. Для их выявления делают посевы воздуха на среду Гарро с последующим выделением и идентификацией чистой культуры.

При лабораторной диагностике стрептококки необ­ходимо дифференцировать с энтерококками (Streptococ­cus faecalis), для которых характерны следующие отли­чительные признаки: способность расти при температу­ре от 10 до 45 °С, устойчивость к высоким концентра­циям натрия хлорида, к пенициллину, щелочной среде (рН 9,6). Энтерококки обнаруживаются при заболева­ниях двенадцатиперстной кишки, желчного пузыря, мо­чевых путей. Наличие их во внешней среде служит критерием фекального загрязнения питьевой воды, сточ­ных вод и пищевых продуктов.

Серологическую диагностику стрептококковых ин­фекций проводят у больных хронически текущими за­болеваниями, леченных большими дозами антибиотиков и сульфаниламидных препаратов, т. е. когда выделение возбудителя бактериологическими методами представ­ляет большие трудности. Она предусматривает опреде­ление в крови стрептококкового антигена и специфиче­ских стрептококковых антител к токсинам, в частности к стрептолизину О.

Стрептококковый антиген в сыворотке крови боль­ных определяют при помощи РСК на холоде. Для реак­ции используют антистрептококковую иммунную сыво­ротку, полученную путем гипериммунизации кроликов культурой стрептококка серологической группы А. За титр антигена принимают наибольшее разведение ис­следуемой сыворотки, вызывающее задержку гемолиза не менее чем на + +.

Определение антистрептолизина О, содержащегося в сыворотках больных, основано на способности его нейтрализовать гемолитическую активность стрептолизина О. Для этого делают кратные разведения сыворотки больного и к ним прибавляют стрептолизин О (произ­водственный препарат). Смесь выдерживают в термо­стате при температуре 37°С в течение 15 мин и добав­ляют во все пробирки по 0,2 мл взвеси эритроцитов кролика. Пробирки вновь помещают в термостат на 1 ч, а затем учитывают результаты реакции.

Для серологической диагностики применяются так­же методы определения антител к другим токсинам, вы­деляемым стрептококками, например, к антистрептогиалуронидазе.

 

Streptococcus pneumoniae (пневмококк)

Пневмококки впервые были описаны Пастером, Шамберланом и Ру в 1871 Рі.

Морфология и биологические свойства. Пневмококки представляют собой парно расположенные кокки овальной, слегка вытянутой ланцетовидной формы, напоминающие пламя свечи. Они могут располагаться также короткими цепочками, напоминая стрептококки. В организме человека и животных образуют капсулу; при выращивании на искусственных средах она отсутствует. Неподвижны, спор не образуют, грамположительны.

По типу дыхания — факультативные аэробы. На простых питательных средах не растут или дают скудный рост. Выращивают их на средах с добавлением белка: кровяных, сывороточных, с асцитической жидкостью. На кровяном агаре колонии пневмококков мелкие, напоминающие росинки, прозрачные в проходящем свете, с вдавленным центром, окружены зоной неполного гемолиза, зеленоватого оттенка, сходные с колониями зеленящего стрептококка. На жидких средах дают нежное помутнение, иногда образуя осадок. Биохимически довольно активны: разлагают глюкозу, лактозу, мальтозу, инулин и другие углеводы с образованием кислоты, не разжижают желатина, не образуют индола. Расщепление инулина является дифференциально-диагностическим признаком, помогающим отличить пневмококки от стрептококков, которые инулин не разлагают. Важным отличительным признаком служит способность пневмококков растворяться в желчи, в то время как стрептококки хорошо в ней сохраняются.

Токсинбобразование. Пневмококки содержат эндотоксин, а также гемотоксин, фибринолизин, лейкоцидин, гиалуронидазу. Вирулентность пневмококка связана с веществом капсулы. В ней находится антифагин, препятствующий фагоцитированию лейкоцитами пневмококков.

Устойчивость. Пневмококки малоустойчивы во внешней среде. Они быстро теряют жизнеспособность под действием различных дезинфицирующих веществ. При температуре 60°С погибают в течение 10 мин. На искусственных питательных средах сохраняются не более 6— 7 дней. Вместе с тем пневмококки довольно устойчивы к высушиванию: в высушенной мокроте остаются жизнеспособными до 2 мес. Под действием оптохина в концентрации 1 : 1 ООО ООО быстро погибают.

Антигенная структура. У всех пневмококков имеется один общий видовой протеиновый антиген, находящийся в цитоплазме. В капсуле пневмококков имеются различные полисахариды, специфичные для  каждого типа. В настоящее время пневмококки делят по капсульному антигену на 80 типов. Считают, что наибольшее значение в патологии человека имеют I, II и III типы, но с каждым годом выявляется патогенность новых типов.

Патогенность. Пневмококки могут вызывать заболевания у телят, поросят, ягнят, собак. В лабораторных условиях наиболее восприимчивы белые мыши и кролики. При парентеральном введении белым мышам небольшого количества патологического материала или чистой культуры пневмококка у них развивается картина септического заболевания, приводящая через 18—24 ч к смерти животного. В крови и органах при микроскопии видны пневмококки в капсулах.

Патогенез и клиника. Пневмококки являются возбудителями крупозной пневмонии у человека. Они могут также вызывать ползучую язву роговицы, катары верхних дыхательных путей, менингит, эндокардит, поражения суставов и другие заболевания. Вместе с тем пневмококки являются обитателями слизистой оболочки верхних дыхательных путей здорового человека. Установлено, что у здоровых носителей встречаются маловирулентные штаммы, не относящиеся к I, II и III типам, поэтому инфекция в большинстве случаев носит экзогенный характер и передается воздушно-капельным путем. Понижение сопротивляемости организма в результате переохлаждения, переутомления, перенесенного гриппа и другие неблагоприятные факторы способствуют возникновению заболевания. Входные ворота инфекции — слизистая оболочка верхних дыхательных путей. При крупозной пневмонии поражаются доли легкого или все легкое. Болезнь сопровождается высокой температурой, ознобом, сухим болезненным кашлем и другими симптомами. Микробные токсины поражают сосудистую и центральную нервную системы. В связи с успешным применением антибиотиков роль пневмококка в этиологии пневмоний резко снизилась.

Иммунитет. У людей довольно выражена естественная невосприимчивость к пневмококковой инфекции.

Об этом свидетельствует частое обнаружение пневмококков на слизистой оболочке верхних дыхательных путей здоровых лиц. После перенесенного заболевания иммунитет малонапряженный, кратковременный, типоспецифический. Перенесенная пневмококковая инфекция предрасполагает к повторным заболеваниям, так как пневмококки обладают сенсибилизирующими свойствами.

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования являются мокрота, кровь, мазок из зева, спинномозговая жидкость. Ввиду того что пневмококк быстро погибает, патологический материал необходимо как можно скорее доставить в лабораторию для исследования. Из этого материала готовят мазки, окрашивают их по Граму и по методу Гинса, а затем микроскопируют. Обнаружение ланцетовидных диплококков, окруженных бесцветной капсулой, дает основание предположить наличие пневмококков. Затем производят микробиологическое исследование патологического материала. С этой целью делают посев на кровяной агар и сывороточный бульон. Одновременно используют биологический метод, вводя внутрибрюшинно исследуемый материал двум белым мышам. Уже через 4-6 часов у них появляются первые признаки заболевания. Мышей под наркозом вскрывают или отсасывают пунктат из брюшной полости. Кусочки внутренних органов, кровь или пунктат засевают в сывороточный бульон и на кровяной агар. На следующий день просматривают посевы, отмечают характер роста, микроскопируют, выделяют чистую культуру. Для дифференциации от стрептококка делают посев исследуемой культуры в пробирку с 10% желчным бульоном и в среду с инулином. Если через 24 ч инкубации в термостате в пробирке с желчным бульоном произошло полное просветление среды (вследствие лизиса микробов), а в пробирке инулином— покраснение ее, указывающее на разложение инулина, выделенную культуру относят к пневмококкам. Для определения типа пневмококка ставят реакцию агглютинации с противопневмококковыми сыворотками,  Профилактика и лечение. Меры профилактики сводятся к закаливанию организма; следует избегать рез- ч кого охлаждения. Специфическую профилактику не проводят.

Для лечения с успехом используют сульфаниламидные препараты и антибиотики (пенициллин, тетрациклин).

  Стрептококки пневмонии (за старой номенклатурой — пневмококки) впервые были описаны Л. Пастером в 1881 Рі. В чистой культуре их выделили и выяснили их роль при воспалении легких К. Френкель и А. Вейксельбаум (1886).

  Морфология и физиология. Стрептококки пневмонии — парной расположенные кокки вытянутой ланцетовидной формы, которые напоминают контуры пламени свечи. Размеры их колеблются от 0,5 до 1,5 мкм. В организме человека образуют капсулу, которая окружает две клетки вместе. При выращивании на питательных средах она отсутствует. Спор и жгутиков не имеют, граммположительные.

 

 Пневмококки — факультативные анаэробы, но хорошо растут и в аэробных условиях при 37 °С. На простых средах не культивируются. Их выращивают на средах с добавлением крови или сыворотки. На кровяном агаре образуют мелкие прозрачные росинки колоний, окруженные зоной позеленения.

 На жидких средах вызывают слабое помутнение с осадком. Биохимически активные, раскладывают ряд углеводов до кислоты, желатин не разреживают. Вирулентные пневмококки раскладывают инулин и растворяются в желчи, что используют для их идентификации. Они продуцируют гемотоксин, лейкоцидин, гиалуронидазу, а также имеют эндотоксин. Вирулентные свойства пневмококков, в основном, определяют капсулы, которые подавляют фагоцитоз.

  Антигены и классификация. Стрептококки пневмонии имеют три основных антигена — полисахарид клеточной стенки, капсульный полисахарид и М-белок. За капсульным антигеном все пневмококки разделены на 85 серовара, 15 из них могут вызывать у людей крупозную пневмонию, септицемию, менингит, артрит, отит, гайморит, ринит, ползучую язву роговицы.
 Экология.
Основными биотопами пневмококков у человека есть ротоглотка и носоглотка. Отсюда они попадают в нижние дыхательные пути и при снижении резистентности организма и ослаблении иммунитета могут вызывать воспаления легких и другие заболевания. Если возбудитель выделяется с мокротой, возможно экзогенное заражение здоровых людей воздушно-капельным способом. Носительство пневмококков и заболеваемость имеют сезонный характер с максимальной частотой зимой. Вне организма стрептококки пневмонии быстро погибают. Имеют высокую чувствительность к дезинфицирующим средствам. Нагревание до 60 °С инактивует их через 10 мин. Чувствительные к пенициллину и его производных.
 Иммунитет
имеет типоспецифический характер, но слабого напряжения и недолговременный. Напротив, у некоторых людей после перенесенной болезни возникает повышенная чувствительность к повторным заражениям или заболевание переходит в хроническую форму.

 

  Профилактика и лечение. Общие профилактические мероприятия сводятся к закалыванию организму, избегать сильного переохлаждения. Специфическая профилактика не проводится, вакцин нет. Для лечения с успехом используют пенициллин, эритромицин, олеандомицин и сульфаниламидные препараты.
 К роду стрептококков принадлежит еще S. faecalis (фекальный стрептококк, энтерококк), шаровидной или овальной формы диплококк, который населяет кишечник людей и животных. Способность энтерококков размножаться в пищевых продуктах иногда приводит к возникновению пищевых токсикоинфекций. Как условно-патогенный микроб при ослаблении защитных сил организма он может вызывать гнойно-септические заболевания, чаще в виде смешанной инфекции. Большинство клинических штаммов энтерококков имеют высокую стойкость к антибиотикам и другим химиотерапевтическим препаратам.

 Анаэробные стрептококки (Peptostreptococcus anaerobius, P. lanceolatum и др.). также могут быть возбудителями тяжелых послеродовых гнойно-септических заболеваний, гангренозных процессов и даже сепсиса.

 

Лабораторная диагностика пневмококковой инфекции

Стрептококки пневмонии (пневмококки) — Strepto­coccus pneumoniae являются возбудителями крупозной пневмонии, очаговой пневмонии и других заболеваний дыхательных путей, ползучей язвы роговицы, нагноительных процессов в среднем ухе, верхнечелюстной па­зухе, а также сепсиса и менингита.

Исследованию подвергают мокроту, гной, спинно­мозговую жидкость, кровь, органы трупа.

Бактериоскопическое исследование. Из изучаемого материала (кроме крови) готовят два мазка, один из которых окрашивают по Граму, а другой (для обнару­жения капсул) — по Бурри или по Козловскому: микро­организмы и каплю туши, нанесенные на поверхность стекла, смешивают круговыми движениями для получе­ния обычного мазка. Тушь предварительно разводят изотоническим раствором натрия хлорида в соотноше­нии 1:4. Мазок высушивают на воздухе, не фиксируют и окрашивают в течение 2—3 мин формолгенциановым фиолетовым (10 мл 40 % формалина и 1,5 Рі генциано-вого фиолетового). Вместо формолгенцианового фиоле­тового можно применять 0,33 % водный раствор фук­сина и 3 % щелочной раствор метиленового синего. При микроскопии на черно-сером фоне видны неокрашен­ные капсулы, в которых располагаются клетки бакте­рий фиолетового цвета. Пневмококки расположены по­парно, клетки их имеют вытянутую форму в виде пла­мени  свечи  и  окружены  капсулой  . Таким образом, на основании микроскопии можно судить о наличии возбудителя. Однако более достоверные данные получают при бактериологическом исследовании.

Бактериологическое исследование. Для выделения чистой культуры 5—10 мл крови сеют в сывороточный бульон (1 часть сыворотки и 3 части МПБ, рН 7,2—7,4) или в сахарный бульон, или в специальную среду, 100 мл которой содержат 1,8—2,0 мл агар-агара, 70—75 мл гидролизата по Хоттингеру или гидролизата казеина (1,8—2,0 г/л аминного азота), 20—25 мл гидролизата бычьих сердец (1,40—1,60 г/л аминного азота), 4— 5 мл дефибринированной крови лошади, 0,5—0,7 мл экстракта пекарских дрожжей. После 18—24-часовой инкубации в термостате производят пересев в чашку с 10 % кровяным агаром. Спинномозговую жидкость цент­рифугируют и осадок сеют на кровяной агар. Колонии пневмококка напоминают колонии стрептококка: мел­кие, почти плоские, непрозрачные, с ореолом зеленого цвета, реже гемолиза. Характерно вдавление в центре колонии.

Непосредственный посев материала на питательные среды (мокрота, гной) обычно не дает положительного результата, так как в присутствии сапрофитов, особенно гнилостных микроорганизмов, рост пневмококков по­давляется. Поэтому гной и мокроту предварительно обрабатывают — выбирают комочки, растирают их в фар­форовой ступке, добавляя 1 мл изотонического раство­ра натрия хлорида, и вводят внутрибрюшинно белым мышам. Мыши очень чувствительны к пневмококку, они погибают от пневмококковой септицемии через 18— 72 ч. Труп мыши вскрывают, кровь из сердца, кусочки внутренних органов и перитонеальную жидкость сеют в чашку с кровяным агаром и в пробирку с сывороточным бульоном.

На основании морфологических и культуральных свойств  трудно дифференцировать пневмококки от зе­ленящих стрептококков. Для этого применяют реакцию растворения пневмококков желчью: 1 мл бульонной культуры вносят в стерильную пробирку и добавляют 0,5 мл бычьей желчи. Через 10—15 мин пребывания в термостате происходит полный лизис пневмококков. Контролем является пробирка с бульонной культурой пневмококка без желчи. Зеленящий стрептококк, коло­нии которого похожи на колонии пневмококка, не лизируется желчью. При наличии лизиса производят посев в среде «пестрого» ряда. В отличие от стрептококка, пневмококк расщепляет инулин с образованием кисло­ты и образует аммиак из аргинина.

На основании проведенного исследования можно окончательно определить вид выделенного микроорга­низма. Учитывается ланцетовидная форма диплококков, наличие капсулы в нативном материале, высокая ви­рулентность для белых мышей, растворение желчью и расщепление инулина.

 

 

Грамотрицательные кокки

  Грамотрицательные коки входят в семейство нейссерий (Neisseriaceae). Семья достала название на честь А. Нейсера, который первым открыл в 1879 Рі. один из видов этой группы — возбудителя гонореи. Важное значение в инфекционной патологии человека имеет еще возбудитель менингококковой инфекции. Другие виды принадлежат к условно-патогенным микроорганизмам, которые являются представителями нормальных микробиоценозов человека, но иногда могут вызывать госпитальные инфекции.

Возбудитель эпидемического цереброспинального менингита (Neisseria meningitidis) подробно описан и выделен в чистой культуре Вейксельбаумом в 1887 Рі.


Морфология и биологические свойств. Менингококк относится к роду нейссерий (Neisseria), который включает, помимо менингококка, ряд непатогенных представителей, встречающихся в полости рта, носоглотке и верхних дыхательных путях. Это диплококки, круглые или слегка овальные, бобовидной формы, соединенные между собой по длинной оси вогнутыми сторонами, размером 0,6—0,8 мкм. В мазках из чистых культур могут находиться беспорядочно; в патологическом материале характерно парное расположение клеток различной величины и разной интенсивности окраски. Все нейссерии, в том числе и менингококки, грамотрицательны. Спор не образуют, жгутиков не имеют. В организме человека могут образовывать нежную капсулу, которую утрачивают при культивировании на искусственных средах.

Менингококк — аэроб, на простых питательных средах не растет. Для культивирования используют питательные среды, содержащие нативный белок (сыворотка, кровь, асцитическая жидкость, яичный белок). Оптимальный рН среды 7,0—7,4, температура роста 37°С, при 25°С рост прекращается. На сывороточном агаре колонии менингококка мелкие, диаметром 0,5—1 мм, нежные, слегка выпуклые, полупрозрачные, голубоватые в проходящем свете, с ровным краем и гладкой поверхностью. Свежевыделенные штаммы образуют гладкие S-формы колоний, а для старых культур характерно образование шероховатых R-форм колоний. В сывороточном бульоне при росте наблюдается помутнение с осадком и пленкой. Биохимически микроб малоактивен: разлагает только глюкозу и мальтозу с образованием кислоты. Не дает гемолиза на кровяном агаре, не разжижает желатина, не образует индола и сероводорода.


Токсинообразование. Менингококки не выделяют экзотоксина. Образуемый ими эндотоксин липополисахаридной природы, термоустойчив, при внутрибрюшинном или внутривенном введении морской свинке убивает ее в течение 24—48 ч. В естественных условиях животные к менингококку невосприимчивы.

Устойчивость. Во внешней среде менингококк очень нестоек: быстро погибает при отклонении температуры от 37°С, при высыхании. Температура 55°С убивает его в течение 3—5 мин. Плохо переносит охлаждение, поэтому при транспортировке в лабораторию материал должен быть тщательно предохранен от охлаждения и высыхания, а посев следует производить сразу же после его доставки.

Менингококк быстро гибнет под действием различных дезинфицирующих веществ: 1% раствора карболовой кислоты и 0,1% раствора сулемы — в течение 1 мин.

Антигенная структура. У менингококков выделены три антигенные фракции:

1) углеводная С-субстанция, общая для всех менингококков, гонококков и пневмококков III типа;

2) протеиновая Р-субстанция, видовая, одна для всех типов менингококков; 

3) поверхностные типоспецифические антигены, состоящие из полисахаридов или полисахаридополипептидов, различные по своему химическому составу.

В соответствии с этим вид Neisseria meningitidis разделяют на 10 групп, обозначаемых большими буквами латинского алфавита, из которых наибольшая роль принадлежит группам А, В и С. Штаммы группы А считают «эпидемическими», так как преимущественно с ними связано возникновение эпидемических вспышек менингита. Штаммы групп В и С чаще являются причиной спорадических случаев заболеваний.

Патогенез и клиника. Источником инфекции являются больные или здоровые носители менингококка, а также лица, перенесшие стертые формы в виде кратковременной лихорадки, с явлениями катара верхних дыхательных путей. Менингококки встречаются на слизистых оболочках носоглотки и верхних дыхательных путей у 5—10% здоровых людей. Клинические проявления заболевания весьма разнообразны. Выделяют следующие основные клинические формы: назофарингит, менингит, менингококковый сепсис. Попадая на слизистую оболочку носоглотки, менингококк распространяется по лимфатическим и кровеносным сосудам, проникает в оболочки спинного и головного мозга и вызывает в них гнойное воспаление. Эпидемический церебральный менингит начинается остро, после 2—4 дней инкубации. Отмечаются высокая температура, сильная головная боль, рвота, судороги, ригидность мышц и другие признаки поражения центральной нервной системы. Заболевание длится несколько недель. До применения антибиотиков и сульфаниламидных препаратов летальность составляла 30—60%. В настоящее время прогноз благоприятный.

Иммунитет. Врожденный иммунитет отсутствует. В связи с широко распространенным бактерионосительством менингококка (соотношение больных и здоровых бактерионосителей от 1 на 1000—2000 до 1 на 20 000) возникает приобретенный естественный иммунитет. Чувствительность к менингококковой инфекции зависит от уровня приобретенного иммунитета, вирулентности штамма и других причин. После перенесенного заболевания возникает стойкий иммунитет. Повторные случаи заболевания редки. В процессе болезни вырабатываются различные антитела: агглютинины, преципитины, опсонины и комплементсвязывающие антитела.

Микробиологическая диагностика. При менингите исследуют спинномозговую жидкость (ликвор), кровь, у бактерионосителей — слизь из носоглотки. Спинномозговую жидкость в количестве 2—5 мл центрифугируют. Из осадка готовят мазки, окрашивают их водным раствором фуксина или метиленового синего. При наличии бобовидных, расположенных внутриклеточно диплококков выдают ориентировочный ответ. Помимо микроскопического, проводят микробиологическое исследование. Посев 2—3 капель осадка спинномозговой жидкости делают на сывороточный агар. К оставшейся в пробирке надосадочной части добавляют 2—5 мл полужидкого агара. Посевы инкубируют при 37°С в течение 24 ч. На следующий день изучают колонии, отсевают на скошенный сывороточный агар для выделения чистой культуры. Идентификацию микроба производят на основании морфологических, тинкториальных и культуральных свойств. В случае необходимости (при обследовании в эпидемических очагах) определяют серогруппы менингококка с помощью реакции агглютинации, используя групповые противоменингококковые сыворотки. Носоглоточную слизь, содержащую постороннюю микрофлору, засевают, помимо сывороточного агара, на плотную среду, содержащую ристомицин. Он подавляет рост грамположительных кокков и не действует на нейссерий. Для дифференциации менингококка от непатогенных нейссерий, которые часто встречаются в носоглотке, выделенную культуру засевают на мясопептонный агар и инкубируют сутки при 37°С — вырастают только непатогенные нейссерии. Параллельно делают посев выделенной культуры на сывороточный aгap и выращивают сутки при 22°С. Нейатогенные нейссерии дают хороший рост при этой температуре, а менингококки не растут. Для окончательной идентификации культуры делают посев на среды, содержащие углеводы: глюкозу, лактозу, мальтозу, сахарозу.


Спинномозговую жидкость можно использовать для постановки реакции преципитации. Для этого на нее наслаивают специфическую преципитирующую  противоменингококковую сыворотку. При положительной реакции на границе двух жидкостей появляется белое кольцо.

Профилактика и лечение. Профилактика сводится к проведению карантинных мероприятий в очаге инфекции, выявлению и санации здоровых носителей, соблюдению санитарно-гигиенического режима в общественных и жилых помещениях, на предприятиях. В настоящее время ведется работа по созданию химической вакцины для профилактики менингита.

Для лечения и профилактики с успехом применяются антибиотики (пенициллин, тетрациклины и др.) и сульфаниламидные препараты.

 

Менингококки (Neisseria meningitidis)

  Возбудитель эпидемического гнойного цереброспинального менингита впервые описал и выделил в чистой культуре А. Вейксельбаум в 1887 Рі.

  Морфология и физиология. Клетки менингококков имеют бобоподобную форму или вид кофейных зерен, располагаются как диплококки, спор и жгутиков не образуют, в организме имеют нежные капсулы. За морфологией подобные к гонококкам. В мазках из спинномозговой жидкости расположенные преимущественно внутри лейкоцитов. У менингококков есть фимбрии, с помощью которых они осуществляют адгезию к клеткам слизевой оболочки верхних дыхательных путей.

  Менингококки — аэробы и факультативные анаэробы — очень прихотливые к питательным средам, к которым добавляют кровь или сыворотку. Оптимум культивирования при 37 °С, лучше в атмосфере 5-8 % СО2. На плотной среде образуют нежные прозрачные бесцветные колонии слизистой консистенции, на жидком — помутнение и осадок на дне, со временем на поверхности возникает пленка. Биохимическая активность менингококков выражена слабо, они ферментирують лишь глюкозу и мальтозу до кислоты.


   

 

Настоящего экзотоксина нейсерии менингита не выделяют, их эндотоксин термостойкий и высокотоксичный. От него в значительной мере зависит тяжесть клинического хода менингококковой инфекции. Фактором патогенности является капсула, фимбрии, гиалуронидаза, нейраминидаза и белок внешней мембраны.


 Антигены и классификация.
За полисахаридным капсульным антигеном менингококки разделены на 9 серологических групп, которые обозначаются большими латинскими буквами (А, В, С, D, X, Y, Z W-135, E-29). До недавнего времени в нашей стране доминировали менингококки групп А и В, причем первые чаще вызывали эпидемические вспышки менингококковой инфекции. Теперь встречаются и другие серологические группы.

  Экология. Основным биотопом менингококков в организме есть слизистая оболочка носоглотки больных и носителей. Именно они являются источником менингококковой инфекции. Передача происходит воздушно-капельным способом при значительных скоплениях людей (казармы, учебные заведения, детские садики), где возможные тесные и длительные контакты. Попадая во внешнюю среду, менингококки быстро погибают. Известные дезинфицирующие растворы убивают их за несколько минут. Очень чувствительные они к пенициллину, эритромицину, тетрациклину.
 Заболевания человека.
Болеют чаще дети 1-8 лет. Местом первичной локализации возбудителя является носоглотка. Отсюда менингококки проникают в лимфатические сосуды и кровь. Развивается либо локальная (назофарингит), либо генерализированная форма инфекции (менингит, менингококкемия, менингоэнцефалит, эндокардит, артрит и тому подобное.

 

 При массовом распаде микробных клеток освобождается эндотоксин, наступает токсинемия. Может возникнуть ендотоксиновый шок. Разные клинические проявления заболевания зависят как от активности защитных сил организма, так и от вирулентности менингококков. В последние годы участились случаи менингококкемии с тяжелым ходом. В окружении больного среди контактованих лиц очень часто возникает бактерионосительство.

 

 

Менингит

  Иммунитет. Врожденный иммунитет достаточно стойкий. Заболевание возникает в одного из 200 бактерионосителей. После генерализированной формы менингококковой инфекции развивается стойкий иммунитет. Повторные случаи заболевания случаются редко. В процессе болезни организм производит аглютинины, преципитины, комплементсвязывающие антитела.

 Лабораторная диагностика. Менингококковая инфекция вызывается менингокок­ками (Neisseria meningitidis). Материалом для иссле­дования служит отделяемое носовой части глотки, спин­номозговая жидкость, кровь, соскоб из элементов гемор­рагической сыпи на коже.

Спинномозговую жидкость собирают в стерильную пробирку и сразу же сеют на питательные среды или немедленно, не допуская охлаждения, отправляют в ла­бораторию, так как менингококки очень чувствительны к колебаниям температуры.

Отделяемое слизистой оболочки носовой части глотки снимают специальным тампоном, изогнутым под углом. Наиболее результативным является немедленный посев носоглоточной слизи на плотные питательные среды, причем для максимального разъединения бактериаль­ных клеток используют 2—3 чашки со средой. Если ма­териал будет исследоваться через 3—5 ч после взятия, его засевают в жидкую питательную среду (казеиновый гидролизат ферментативного расщепления с содержа­нием 1,5 г/л аминного азота и добавлением 250 ЕД/мл ристомицина), а затем помещают в водяную баню при температуре 37 °С. После этого его высевают на сыво­роточный агар и помещают в термостат.

Бактериоскопическое исследование спинномозговой жидкости и крови дает возможность определить наличие возбудителя. Если спинномозговая жидкость имеет вид гноя, то мазки готовят без ее предварительной обработ­ки; при незначительной мутности спинномозговую жид­кость центрифугируют, и из осадка делают мазки. Окрашивают их анилиновыми красителями (водный ра­створ основного фуксина, метиленовый синий), так как при окраске по Граму форменные элементы спинномозговой жидкости из­меняются, отмечается большое количество артефактов. Менингококки имеют вид диплококков бобовидной фор­мы, расположенных внутри цитоплазмы лейкоцитов и соприкасающихся вогнутыми краями. Часто обнаружи­вается нежная капсула. При менингококкцемии менин­гококки можно обнаружить в мазках крови. В этом случае готовят препарат толстой капли, окрашивают его 2—3 мин водным раствором метиленовой сини без фиксации, лишнюю окраску смывают водопроводной водой и высушивают препарат на воздухе. На голубом фоне препарата видны окрашенные в темно-синий цвет лейкоциты, а между ними множество мелких, темно-синих кокков, расположенных в виде кучек, парно или по одному.

Экспресс-диагностика осуществляется с помощью реакции преципитации в геле, встречного иммуноэлектрофореза с групповыми преципитирующими антисыво­ротками или радиоиммунологического метода и основана на обнаружении в спинномозговой жидкости или крови больного специфического антигена.

Бактериологическое исследование. Одновременно с бактериоскопией производят посев спинномозговой жид­кости или ее осадка. Менингококк растет на специаль­ных питательных средах, содержащих нативный белок (сывороточный бульон и агар). Можно использовать агар Хоттингера, содержащий 0,15 % нерастворимого крахмала, что значительно удешевляет питательную среду и не изменяет культуральных, ферментативных, агглютинабельных свойств возбудителя. Лучше спинно­мозговую жидкость сеять после центрифугирования при 35000 об/мин в течение 5 мин. Со дна берут 0,3—0,5 мл материала и засевают 2—3 капли на поверхность по­догретой питательной среды. Посев культивируют при температуре 37 °С и повышенном содержании СО2. Для этого в крышку стерильной чашки Петри кладут лист фильтровальной бумаги, пропитанной 1,5—2,0 мл 10 % пирогаллола, а сверху второй лист, смоченный 1,5— 2,0 мл 20 % раствора натрия гидрокарбоната. Чашку с посевом закрывают крышкой с листами бумаги и переворачивают ее (крышкой вниз). Остаток спинномоз­говой жидкости используют для реакции встречного иммуноэлектрофореза.

На 2-й день после инкубации при температуре 37 СС изучают      культуральные свойства. Менингококки образуют небольшие, круглые, выпуклые, прозрачные ко­лонии. В мазках, приготовленных из этих колоний, обна­руживают полиморфные диплококки и тетракокки. Микроскопическая картина настолько пестрая, что создает впечатление нечистой культуры. Колонии пересевают на скошенный сывороточный агар. Если в чашках со специальными средами рост отсутствует, культуру вы­деляют из спинномозговой жидкости, залитой полужид­ким агаром.

На 3-й день исследования выделенную культуру аг­глютинируют менингококковыми сыворотками.

До применения сульфаниламидных препаратов и ан­тибиотиков обязательно определяли серовар менинго­кокка, вызвавшего заболевание, так как лечение прово­дилось специфическими менингококковыми сыворотка­ми. В настоящее время определяют серовар менингокок­ков с эпидемиологической целью, используя реакцию агглютинации по Ноблю. По 3 капли густой взвеси микроорганизмов наливают в 3 пробирки, затем туда вносят по 3 капли неразведенной или разведенной 1 : 10 менингококковой сыворотки сероваров А, В и С. Смесь взбалтывают в течение 2—4 мин, после чего в каждую пробирку доливают 10—20 капель изотонического рас­твора натрия хлорида и учитывают результаты.

Для определения сахаролитической активности чи­стой культуры делают посев на среды с лактозой, глю­козой, мальтозой, сахарозой, фруктозой. Менингококки ферментируют глюкозу и мальтозу с выделением кисло­ты. Производят также посев на 5 % желточный агар и сывороточный агар, содержащий 5 % сахара. Через 48 ч инкубации на поверхность выросших колоний наносят 1 каплю раствора Люголя. Появление бурого окрашива­ния свидетельствует о расщеплении полисахарида. Нейссерии идентифицируют с помощью оксидазной реакции, которая заключается в следующем. На колонию, сфор­мировавшуюся на сывороточном агаре, наносят каплю свежеприготовленного 1 % раствора солянокислого па-радиэтилфенилендиамина. При этом колонии, облада­ющие оксидазной активностью, розовеют, а затем чер­неют. Такие колонии отсевают на сывороточный агар для дальнейшего исследования.

Для дифференциации менингококка и непатогенных нейссерий (Neisseria catarralis) используют свойство последних расти на простых питательных средах, а так же способность образовывать колонии при комнатной температуре (22СС).

Для обнаружения менингококка в крови во флаконы с 50 мл бульона, содержащего 0,1 % агар-агара, засе­вают 5—10 мл крови, взятой стерильно из вены. Через сутки делают пересев культуры на сывороточный агар. Выделение и идентификация культур осуществляются таким же образом, как и при исследовании спинномозго­вой жидкости.

Для серологической диагностики применяют РНГА с эритроцитами, сенсибилизированными группоспецифическими полисахаридами.

Для диагностики назофарингитов и выявления бактерионосительства исследуют слизь из носоглотки, менингита — ликвор, при подозрении на менингококкемию и другие формы генерализированной инфекции — кровь. Пробы с материалом оберегают от охлаждения и исследуют немедленно. Из осадка спинномозговой жидкости и крови изготовляют мазки, окрашивают за Граммом  и метиленовой синькой. Чистую культуру менингококков выделяют на сывороточных средах и определяют серогрупу. В последнее время в лабораторную практику внедренные иммунологические методы экспресс-диагностики из выявления менингококкового антигена в ликворе с помощью иммунофлюоресценции, реакций энзиммеченых антител и тому подобное.

            

 

Профилактика и лечение. Общие профилактические мероприятия сводятся к ранней диагностике, госпитализации больных, санации бактерионосителей, карантина в детских заведениях. С целью специфической профилактики в период эпидемических вспышек менингококковой инфекции применяют химическую вакцину из полисахаридных антигенов серогруп А, В и С. Вакцинацию проводят детям 1-7 лет. Для лечения используют пенициллин, рифампицин, левомицетин и сульфаниламидные препараты, особенно сульфамонометоксин.

 

Гонококки (Neisseria gonorrhoeae)

  Морфология и физиология. Гонококк — возбудитель гонореи и бленнореи — имеет достаточно характерную морфологию.

 Бактериальные клетки бобоподобной формы, расположенные парами, вогнутыми сторонами внутрь и выпуклыми — наружу, граммотрицательные.

      

 

 Размеры их — 0,7-1,8 мкм. В мазках из гноя располагаются внутри лейкоцитов, а в мазках из чистых культур гонококки имеют форму кофейных зерен. Они не образуют спор, неподвижные, но имеют фимбрии, с помощью которых прикрепляются к эпителиальным клеткам мочеполового тракта. При хронической гонорее, а также под воздействием лекарственных препаратов гонококки изменяют форму, размеры, расцветки, что необходимо учитывать при лабораторной диагностике заболевания.

 К питательным средам нейсерии гонореи очень прихотливые. В аэробных условиях растут на свежеизготовленных средах с нативным белком (кровь, сыворотка, асцитична жидкость) при достаточной влажности, 3-10 % СО2 в атмосфере. Колонии мелкие, прозрачные, круглые, с ровными краями и блестящей поверхностью. В бульйоне образуют слабую муть и пленку на поверхности. Их ферментативные свойства слабо выражены, из углеводов раскладывают только глюкозу, протеолитические ферменты отсутствуют. Экзотоксина гонококки не выделяют, но имеют термостабильный эндотоксин, токсичный для человека и лабораторных животных.

        

 

 

 

  Антигенная структура гонококков гетерогенная и изменчивая. Она представлена белковой и полисахаридными комплексами. Описано 16 сероваров, но определение их в лабораториях не проводится.

 Экология. Гонореей болеет лишь человек. Главными биотопами гонококков является слизистая оболочка половых органов и конъюнктива. Вне организма они существовать не могут, так как быстро погибают от высыхания, охлаждения и действия температуры выше 40 °С. Очень чувствительные к растворам нитрата серебра, фенола, хлоргексидина и многих антибиотиков. Однако в связи со значительным увеличением заболеваний в последние годы и неправильным лечением выросло количество нейссерий, стойких к антибиотикам и сульфаниламидным препаратам.
 Заболевания человека. Источником гонококовой инфекции является только больной человек. Возбудитель передается половым путем, реже — через бытовые предметы (полотенца, губки и тому подобное). Попав на слизистую оболочку мочеполовых органов, гонококки благодаря фимбриям проявляют высокие адгезивные свойства, фиксируются на эпителиальных клетках, размножаются и проникают в соединительную ткань. Возникает гнойное воспаление уретры, шейки матки. У женщин поражаются также трубы и яичники, у мужчин — предстательная железа и семенные пузырки. Гонококки редко вызывают генерализированные процессы, но временами могут возникнуть сепсис, воспаление суставов, эндокардит, менингит. При бленнорее новорожденных возникает гнойное воспаление слизевой оболочки глаз.

 


 Иммунитет. Видового иммунитета к гонококкам у человека не существует. Перенесенное заболевание также не оставляет стойкого и длительного иммунитета. Образованные антител не имеют защитных свойств. Клеточный иммунитет не формируется, фагоцитоз имеет незавершенный характер: гонококки не только сохраняются в лейкоцитах, но и размножаются и могут переноситься в другие органы.

Лабораторная диагностика. Возбудителем гонореи является гонококк (Neisseria gonorrhoae), морфологически сходный с менингококком. Для диагностики применяют бактериоскопический, бак­териологический и серологический методы.

Бактериоскопическое исследование является основ­ным методом диагностики острой гонореи и бленнореи. Материал для исследования из мочеиспускательного канала берут следующим образом: наружное отверстие его вытирают ватой, смоченной стерильным изотониче­ским раствором натрия хлорида, надавливают пальцем на заднюю стенку мочеиспускательного канала изнутри кнаружи (у женщин для этого вводят во влагалище указательный палец) и выдавливают каплю гноя. Сек­рет предстательной железы получают путем ее масса­жа. Отделяемое слизистой оболочки шейки матки извлекают тампоном после введения во влагалище зер­кала Куско. При бленнорее отделяемое конъюнктивы снимают петлей и распределяют на стекле. Препарат окрашивают щелочным раствором метиленового синего и по Граму (2 мазка). При микроскопии гонококки имеют вид бобовидных грамотрицательных диплокок­ков, расположенных внеклеточно или внутри клеток (нейтрофильных гранулоцитов) подобно менингокок­кам.

Окраска по Граму позволяет дифференцировать гоно­кокки с другими бактериям. Для получения более четких очертаний гонококков мазки следует фиксировать с помощью диметилсульфоксида (димексида). На мазок наливают димексид до полного высыхания, затем окрашивают, В связи с тем что в исследуемом материале могут находиться и другие грамотрицательные бактерии, сход­ные с гонококками, применяют прямой и непрямой мето­ды иммунофлюоресценции. При прямом методе мазки обрабатывают флюоресцирующими антителами против гонококков, при непрямом — используют известные мик­роорганизмы (гонококки) и сыворотку больного. Соеди­нение антитела с антигеном становится видимым при добавлении флюоресцирующей сыворотки против глобу­линов человека.

Бактериологическое исследование проводят в тех случаях, когда гонококки в мазках не обнаруживают или находят нетипичные, измененные формы. Ввиду особой чувствительности гонококка к температурному фактору материал для исследования не транспортируют. Кроме того, гонококк очень чувствителен к дезинфицирующим веществам, поэтому за 1—2 дня до посева необходимо исключить применение больным дезинфицирующих ве­ществ и прекратить антибактериальную терапию.

Посев производят непосредственно после взятия ма­териала в чашки с асцитическим агаром или 2,5 % МПА, приготовленном на кроличьем мясе. Для этой цели ши­роко используются безасцитные среды с гидролизатом казеина, дрожжевым аутолизатом и нативной сыворот­кой крупного рогатого скота. Добавление к питательной среде ристомицина и полимиксина М (10 ЕД/мл) значи­тельно повышает высеваемость гонококков. Перед посе­вом питательную среду следует нагреть в термостате. Для лучшего роста гонококков чашки с посевами поме­щают в эксикатор, где концентрация СО2 достигает 10%.

Через сутки инкубации посевов при температуре 37 °С появляются прозрачные, с ровными краями, выпуклые, слизистой консистенции колонии гонококка, напомина­ющие капли росы. Выделяют чистую культуру и иденти­фицируют ее. Биохимически гонококк мало активен, он расщепляет только глюкозу с образованием кислоты. Для определения оксидазной активности культуру высевают в желточную среду (к 100 мл МПА из кроличьего мяса добавляют 1,5 Рі глюкозы, 6 мл раствора фенолового красного и 16 мл желтка куриного яйца). Агглютинация специфической сывороткой не всегда дает положительные результаты, так как гонококк имеет много сероваров, а в сыворотке соответствующие агглютинины могуг содержаться в низком титре. Серологическую диагностику проводят при хрони­ческой гонорее, когда у больного отсутствуют выделения и провести бактериоскопическое и бактериологическое исследование не представляется возможным. В этих случаях используют РСК с сывороткой крови больного. В качестве антигена применяют гонококковую вакцину или специальный антиген, приготовленный из убитых разными способами гонококков  (чаще антиформином).

 

 Исследуемый материал — выделение из уретры, влагалища, шейки матки, моча; при бленнорее — гной из конъюнктивы глаза. Основной метод диагностики — микроскопический. Мазки окрашивают за Граммом  и метиленовой синькой. Выявление при микроскопии бобовоподобных диплококков внутри лейкоцитов дает возможность поставить диагноз гонореи. Значительно реже проводят выделение чистой культуры и ее идентификацию. При хроническом ходе заболевания используют РЗК или реакцию непрямой гемагглютинации.

 

 

Профилактика и лечение. Предупредительные мероприятия заключаются в проведении санитарно-образовательной работы среди населения, своевременном выявлении и лечении больных. Для индивидуальной профилактики после случайных половых контактов используют 0,05 % раствор хлоргексидина. С целью предупреждения бленнореи всем новорожденным закапывают в глаза раствор пенициллина или нитрата серебра. Вакцинопрофилактика не проводится. Лечат гонорею пенициллином и сульфаниламидными препаратами. При хронических формах с лечебной целью применяют гонококовую убитую вакцину.

1. Лабораторная диагностика стафилококковых и стрептококковых инфекций

  Материалом для исследования является гной, кровь, мокрота, слизь с рото-, носоглотками, воспалительным экссудатом, мочой; в случае подозрения на пищевую токсикоинфекцию — промывные воды желудка, блевотные массы, испражнения, остатки еды; при санитарно-бактериологических контролях — смывы из рук, столов и других предметов.

 Из открытых гнойных поражений материал берут ватным тампоном после удаления раневого налета, в котором есть сапрофитные стафилококки из воздуха, кожи и тому подобное. Из закрытых гнойников делают пункцию стерильным шприцем. Слизь с рото- и носоглотками берут стерильным тампоном. Мокроту и мочу собирают в стерильные пробирки, банки. Кровь (10 мл), взятую из локтевой вены, и ликвор — при пункции спинномозгового канала, с соблюдением асептики сеют возле кровати больного у 100 мл сахарного бульйона.

 Из всех материалов, кроме крови и смывов, изготовляют мазки, окрашивают за Граммом, микроскопируют, делают посевы на кровяной и желтково-солевой агар и на протяжении суток выращивают при 37 °С. Посевы нужно делать немедленно и на свежие среды. Через 24 часа исследуют колонии, отмечают наличие гемолиза, лецитинази, пигмента; в мазках из колоний обнаруживают типичные граммположительные кокки. Делают пересев на скошенный агар для выделения чистой культуры и после ее получения определяют ферментацию глюкозы в анаэробных условиях и факторы вирулентности — плазмокоагулазу,  ДНКазу, гиалуронидазу, некротоксин и тому подобное. Обязательно определяют чувствительность культуры к антибиотикам с целью рационального выбора препаратов при лечении. Для выявления источника инфекции с помощью международного набора стафилококковых бактериофагов устанавливают фаговар выделенной культуры. У штаммов, выделенных при пищевых токсикоинфекциях, определяют способность продуцировать энтеротоксин. Для этого культуру сеют на специальную среду и инкубируют при 37 °С в атмосфере 20 % СО2 на протяжении 3-4 суток, фильтруют через мембранные фильтры и вводят сосункам котят в брюшную полость или зондом в желудок.

  При стрептококковых инфекциях для лабораторной диагностики берут аналогичным способом тот же материал, что и при заболеваниях стафилококковой этиологии. В мазках из исследуемого материала стрептококки располагаются короткими цепочками, иногда в виде диплококков или единичных клеток, так что отличить их от стафилококков часто невозможно. Следовательно, необходимо проводить и бактериологическое исследование. Поскольку стрептококки прихотливые к питательным средам, посевы делают на сахарный бульйон и кровяной агар. Спустя сутки в жидкой среде наблюдают рост в виде осадка на дне пробирки. На агаре вырастают мелкие, плоские, суховатые колонии с зонами гемолиза или позеленения. В мазках из колоний стрептококки располагаются в одиночку, парами или короткими цепочками, тогда как в мазках из культуры на бульйоне они образуют типичные длинные цепочки. В следующие дни выделяют чистую культуру, определяют вид, серогрупу и серовар.

  Определения чувствительности стрептококков к антибиотикам проводят на среде АГВ с добавлением 5-10 % дефибринированной крови кролика.

  Для выделения анаэробных стрептококков посевы проводят на среду Китта-Тароцци, где они растут с образованием газа. Вирулентность стрептококков определяют за их способностью продуцировать токсины и ферменты (гемолизин, гиалуронидаза, фибриназа и тому подобное) или путем заражения белых мышей.

  Бактериологическое исследование для диагностики скарлатины в большинстве случаев не проводится, так как диагноз заболевания устанавливают за клиническими симптомами.

 Серологическую диагностику стрептококковых инфекций проводят редко, в основном тогда, когда возбудитель выделить невозможно. При этом в крови больных определяют антитела против стрептококковых токсинов (антистрептолизин О, антистрептолизин S, антистрептогиалуронидаза). Чаще такие исследования проводят при хронических стрептококковых инфекциях, например, при ревматизме.

 С целью контроля за санитарным состоянием предприятий общественного питания и личной гигиены их работников проводят бактериологические обследования методом посевов смывов из рук, посуды, оборудования. Такие же смывы делают из рук хирургов, акушерок, операционных сестер, инструментария и тому подобное для выявления гноєродных кокков. Кроме того, у медицинских работников исследуют слизь из носоглотки для установления носительства золотистых стафилококков. С этой целью лаборатория готовит стерильные ватные тампоны на деревянных палочках или алюминиевом проводе в пробирках с сахарным бульйоном. Таким тампоном, смоченным в среде, делают смывы из рук (ладоней, тыльной стороны, между пальцами, ногтевого ложа), и предметов. Тампон опускают в пробирку, окунувши его в бульйон, и ставят в термостат при 37 °С. Через 18-20 год делают пересев с целью выделения чистой культуры и определения вида.

 При диагностике пневмококковых инфекций используют бактериоскопический, бактериологический и биологический методы. Исследуемый материал — мокроту, гной, ликвор, кровь, мазки с рото- и носоглотками. Стрептококки пневмонии быстро погибают, потому исследуемый материал нужно как можно скорее доставить в лабораторию. Из материала (кроме крови) изготовляют мазки, окрашивают за Граммом и за Гинсом, микроскоппруют. Выявление ланцетовидных диплококков, окруженных капсулой, позволяет допустить наличие пневмококков. Но на слизистой носоглотки могут быть сапрофитные диплококки. Поэтому проводят бактериологическое исследование. Материал сеют на кровяной агар и сывороточный бульйон, выделяют чистую культуру и определяют вид. Одновременно используют биологический метод. Для этого белым мышам вводят материал в брюшную полость. Животные через 12-18 ч погибают. Посев крови из сердца при вскрытиии дает чистую культуру возбудителя. Для дифференциации его от других стрептококков культуру сеют в желчный бульйон, где пневмококки, в отличие от других видов, быстро лизируются.

2. Лабораторная диагностика заболеваний, вызванных нейссериями

  Для проведения бактериологической диагностики гонореи используют микроскопический, бактериологический и серологический методы. При острой гонорее микроскопическая картина в мазках настолько характерная, что диагноз относится достаточно быстро. Материал из уретры берут так. Внешнее отверстие мочевыводящего канала вытирают стерильным тампоном, смоченным в изотоническом растворе хлорида натрия. Потом слегка нажимая на уретру, выдавливают каплю гноя. У женщин каплю выделений из уретры или шейки матки берут петлей. Изготовляют два мазка, один из них окрашивают метиленовой синькой, другой — за Граммом. В мазках обнаруживают много лейкоцитов, в цитоплазме отдельных из них находятся характерные бобоподобной формы диплококки. При окрашивании метиленовой синькой цитоплазма лейкоцитов выглядит голубой, гонококки и ядра клеток — темносиними. За методом Грамма нейсерии окрашиваются в красный цвет. На основе микроскопии быстро выдают результат о выявлении гонококков.

  При хронической гонорее в мазках гонококков часто не находят. Тогда проводят выделение возбудителя и его идентификацию. В связи с высокой чувствительностью гонококков к изменению температуры материал от больного при транспортировке защищают от низкой температуры (особенно зимой) и быстро доставляют в лабораторию. Еще лучше взятый материал посеять возле кровати больного свежим, влажным, подогретым сывороточным агаром или МПА, изготовленный на кроличьем мясе. К средам добавляют по 10 ЕД/МЛ полимиксина и ристомицина для подавления роста посторонней микрофлоры. Посевы виращивают в атмосфере с 10 % СО2. Выделенные культуры идентифицируют по биохимическим признакам (гонококк раскладывает лишь глюкозу).
 В случаях хронической гонореи используют и серологический метод диагностики — постановку реакции связывания комплемента Борде-Жангу. У больного берут сыворотку крови (антитела). Антигеном у РСК служит гонококовая вакцина или специальный антиген, изготовленный из убитых антиформином гонококков. Употребляют также РНГА и внутрикожную аллергическую пробу. Младший медицинский персонал должен сурово хранить врачебную тайну относительно диагноза венерического заболевания, чтобы не нанести морального вреда пациенту.

  Для лабораторной диагностики менингококковых инфекций материалом служит слизь из носоглотки, спинномозговая жидкость, кровь, скребки с висипок на коже. Выделения из задней стенки носоглотки берут натощак ватным тампоном, закрепленным на согнутом проводе. Конец тампона направляют кверху и вводят за мягкое небо, при этом шпателем придавливают корень языка. Взятый материал при заборе не должен касаться зубов, языка и слизевой оболочки щек. Его немедленно засевают на сывороточный агар с добавлением ристомицина для притеснения роста граммположительных кокков.
 Спинномозговую жидкость берут при люмбальной пункции в стерильную пробирку и немедленно сеют на сывороточную среду или, оберегая от холода, быстро доставляют в лабораторию. Кровь в количестве 10 мл получают из вены еще к началу лечения и сеют возле кровати больного в флакон с жидкой средой, выращивают в атмосфере 5-10 % СО2. Менингококки в ликворе можно быстро обнаружить микроскопическим методом. Если жидкость гнойная, мазки изготовляют без любой предыдущей обработки; при небольшом помутнении — центрифугируют, и мазки делают из осадка. Окраску лучше проводить метиленовой синькой, при этом менингококки имеют вид бобоподобных диплококков, расположенных в лейкоцитах и поза ими. При менингококкемии нейсерии можно обнаружить в препаратах толстой капли крови. Результаты микроскопии немедленно сообщают врачу.
 Одновременно с бактериоскопией проводят и бактериологическое исследование. Спустя сутки после первичных посевов отмечают характер роста в флаконе или изолированных колоний на плотной среде, пересевают на скошенный сывороточный агар для выделения чистых культур, которые потом идентифицируют за оксидазной реакцией и другими биохимическими признаками и определяют серогрупу .

 В последнее время важное значение приобретают методы экспресс-диагностики, которые позволяют обнаружить антигены нейсерий с помощью иммуноферментного анализа (ИФА), иммунофлуоресценции и иммуноэлектрофореза. При наличии менингококкового эритроцитарного диагностикума серогруп А, В и С можно ставить реакцию непрямой гемагглютинации для выявления антител в сыворотке крови больных.

 Доставка материала в лабораторию сопровождается направлением, в котором отмечают фамилию и инициалы больного (носителя), диагноз заболевания, вид материала, какие исследования необходимо провести, дату и время забора материала. Бактериологическая лаборатория после проведения исследований выдает ответ в виде “Результата микробиологического анализа”, в котором указывается, что у больного А. из крови (гноя, мочи, мокроты и тому подобное) выделен S. аureus (S. pyogenes, S. pneumoniae), какой чувствительный (резистентный) к антибиотикам (перечисляется).

Источники информации:

<http://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%92%D0%B8%D1%80%D1%83%D1%81%D1%8B>

http://www.kcom.edu/faculty/chamberlain/Website/Lects/PROPERT.HTM

http://biology.about.com/library/weekly/aa110200a.htm

http://web.mit.edu/esgbio/www/cb/virus/virus.html

http://www.microbelibrary.org/asmonly/details.asp?id=2402

http://www.pubmedcentral.nih.gov/pagerender.fcgi?artid=1254937&pageindex=1

http://virology-online.com/viruses/Enteroviruses6.htm

http://www.innvista.com/health/microbes/viruses/rhinovir.htm

http://www.rkm.com.au/VIRUS/FootandMouth/index.html



Источник: intranet.tdmu.edu.ua


Добавить комментарий