Методы окраски ретикулоцитов

Методы окраски ретикулоцитов

Определение концентрации лейкоцитов

Определение концентрации лейкоцитов в крови имеет важное значение как для оценки функционального состояния здорового человека, так и для диагностики заболеваний.

Оснащение

1, Пипетка объемом 0,02 мл.

2.3%-ный раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым синим.

  1. Камера Горяева (описание и порядок работы с ней см в работе «Определе­ние концентрации эритроцитов»).

  2. Пипетка объемом 1 мл.

  3. Пробирка.

Техника выполнения

  1. В пробирку вносят 0,4 мл уксусной кислоты и добавляют 0,02 мл крови, тщательно промывая пипетку. Перемешивают. Получается разведение 1:20.

  2. Заполняют камеру Горяева.

  3. Оставляют счетную камеру на 1-2 минуты для осаждения формен­ных элементов.

  4. Подсчитывают лейкоциты в 100 больших квадратах. Это все боль­шие неразлинованные квадраты, которые в сетке камеры Горяева сгруппиро­ваны по 4 (см. рис.1).

5. Вычисляют концентрацию лейкоцитов в 1 л крови (Л) по формуле:

N*4000*20

Л* 106, где

1600

N — количество лейкоцитов, сосчитанных в 100 больших квадратах; 1600 — количество сосчитанных малых квадратов (100*16=1600);

4000 — множитель, приводящий объем малого квадрата (1/4000 мкл) к объему I мкл крови;

106— количество микролитров в 1 литре. Множитель 10 9 в системе СИ принято заменять приставкой «Г» (гига). На­пример, 6,0 Г/л.

На практике число лейкоцитов, подсчитанных в 100 больших квадратах, де­лят на 20 и получают результат в «Г/л».

Источники ошибок: те же, что при подсчете эритроцитов

Оценка результатов

В норме концентрация лейкоцитов составляет 4,0-9,0 Г/л. Уменьшение концентрации лейкоцитов в крови (лейкопения) всегда носит патологический характер. Увеличение концентрации лейкоцитов в крови (лейкоцитоз) может бить физиологическим, то есть возникать у здоровых людей (пищевой, мио-генный, при беременности), и патологическим.

Число лейкоцитов в периферической крови в первые 5 дней жизни ре­бенка весьма высоко и составляет 18-20 Г/л. В 2-неделъном возрасте оно снижается до 9-12 Г/л, а в последующие периоды онтогенеза не отличается от уровня взрослых.

7) Определение концентрации ретикулоцитов.

Определение концентрации ретикулоцитов

Ретикулоцит — это молодой эритроцит, только что вышедший из крас­ного костного мозга. При обычной окраске он не имеет отличий от зрелых эритроцитов. Для выявления ретикулоцитов используют специальные мето­ды суправитального (прижизненного) окрашивания. Оснащение

  1. 1%-ный раствор бриллиантового крезилового синего в этиловом спирте.

  2. Предметное стекло.

  3. Шлифовальное стекло для изготовления мазка.

  4. Влажная камера, представляющая собой чашку Петри, на дно которой ук­ладывают смоченную водой фильтровальную бумагу.

  5. Микроскоп с иммерсионным объективом.

Техника выполнения

  1. Каплю краски наносят на сухое обезжиренное в смеси спирта с эфи­ром предметное стекло и размазывают ее шлифовальным стеклом. Дают краске высохнуть. Такие стекла могут быть заготовлены в прок.

  2. На приготовленное таким образом стекло, поверх мазка краски, на­носят тонкий мазок крови и немедленно помещают стекло во влажную каме-

  3. Мазок выдерживают во влажной камере 3-5 минут, а затем высуши­вают его на воздухе.

Данная методика окраски ретикулоцитов модифицирована Л.С. Горожани-ным (1967) с целью улучшения качества получаемых мазков. Суть модифи­кации сводится к тому, что краска наносится на стекло в виде капли, после ее высыхания сюда же помещают каплю крови, перемешивают, делают мазок и инкубируют во влажной камере.

  1. Мазок исследуют под микроскопом с использованием масляной им­мерсии. Эритроциты имеют желтовато-зеленую окраску, на фоне которой в ретикулоцитах синяя зернисто-сетчатая субстанция (рис.! 1).

  2. Производят подсчет ретикулоцитов на 1000 эритроцитов (промилле). Целесообразно вставить в окуляр рамку, ограничивающую поле зрения, что облегчает подсчет.

  3. Полученный результат переводят в проценты (%).

Опенка результатов

В норме у взрослых в периферической крови содержится 0,2-1% рети­кулоцитов. Увеличение количества ретикулоцитов (ретикулоцитоз) наблюда­ется при усилении эритропоэза, особенно после кровопотери и при выражен­ном гемолизе. Уменьшение числа ретикулоцитов (ретикулоцитопения) имеет место при угнетении эритропоэза, например, при постгипоксическом эритро-цитозе, а также в условиях патологии костномозговых эритроидных клеток-предшественников.

В течение первых часов жизни количество ретикулоцитов у детей по­вышено и может колебаться в пределах от 0,8-1,3 до 4,2%. Затем этот показа­тель быстро снижается и между 5-м и 7-м днями жизни доходит до мини­мальных цифр. В дальнейшем, если отсутствуют причины для угнетения или стимуляции эритропоэза, концентрация ретикулоцитов в крови детей соот­ветствует уровню взрослых.



Источник: studfile.net


Добавить комментарий